[发明专利]一种用茶皂素溶解月经血红细胞分离宫膜间充质干细胞的方法在审
| 申请号： | 201811117472.X | 申请日： | 2018-09-20 |
| 公开（公告）号： | CN109182263A | 公开（公告）日： | 2019-01-11 |
| 发明（设计）人： | 孙巍群;陈锦阳;刘军权 | 申请（专利权）人： | 浙江卫未生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0775 | 分类号： | C12N5/0775 |
| 代理公司： | 北京志霖恒远知识产权代理事务所(普通合伙) 11435 | 代理人： | 奚丽萍 |
| 地址： | 310051 浙江省杭州市滨*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种用茶皂素溶解月经血红细胞分离宫膜间充质干细胞的方法，包括如下步骤：(1)试剂配制：配置茶皂素溶液；(2)获得细胞沉淀：将月经血样品过滤，离心除去上层血浆，获得细胞沉淀A；向细胞沉淀A中加入茶皂素溶液，充分混合均匀，静置后离心去除上清液，获得细胞沉淀B；(3)细胞培养：将细胞沉淀B用细胞培养液悬浮于培养箱中贴壁培养，收集第3代细胞，即为宫膜间充质干细胞。本发明方法采用茶皂素，不对目的细胞造成损伤即可得到除传统方法得到的单个核以外的宫膜组织，可从月经血中快速高效分离提取单个核细胞和宫膜组织诱导获得宫膜间充质干细胞，且数量是传统白膜层的数倍。 | ||
| 搜索关键词： | 细胞沉淀 间充质干细胞 茶皂素 皂素 血红细胞 月经血 月经 细胞培养 溶解 细胞 单个核细胞 细胞培养液 充分混合 高效分离 离心去除 试剂配制 贴壁培养 样品过滤 白膜层 培养箱 上清液 血浆 损伤 悬浮 诱导 上层 配置 | ||
【主权项】：
1.一种用茶皂素溶解月经血红细胞分离宫膜间充质干细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)试剂配制：配置茶皂素溶液，所述茶皂素溶液为茶皂素浓度为375‑1500mg/L的PBS溶液，经过滤灭菌后冷却至室温；(2)获得细胞沉淀：将月经血样品过滤，离心除去上层血浆，获得细胞沉淀A；向所述细胞沉淀A中加入所述皂素溶液，充分混合均匀，混合均匀后离心去除上清液，获得细胞沉淀B；(3)细胞培养：将所述细胞沉淀B用细胞培养液悬浮于培养箱中贴壁培养，在24h‑48h后倾倒除去未贴壁细胞，换新鲜细胞培养液，而后每2‑3天换细胞培养液，待细胞长至85％‑90％汇合时，消化传代，收集第3代细胞，即为宫膜间充质干细胞。
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