[发明专利]一种肝癌患者来源鸡胚绒毛尿囊膜M-PDX模型构建方法

摘要

本发明公开了一种肝癌患者来源鸡胚绒毛尿囊膜M‑PDX模型构建方法，包括临床样本转运、冻存、复苏以及移植四个步骤。本发明应用低分化、高转移特性的人肝癌细胞，在鸡胚尿囊膜(Chickchorioallantoicmembrane CAM)上建立人肝癌移植瘤及其血管生成模型,为肝癌移植瘤及其血管生成的相关研究提供一个简便实用的手段。本发明相比起传统模型，具有实验周期短，培养成本低，以及方便操作等的独特优势。

主权项

1.一种肝癌患者来源鸡胚绒毛尿囊膜M‑PDX模型构建方法，其特征在于：包括临床样本转运、冻存、复苏以及移植四个步骤：S1.临床样本的转运从手术室获得临床肝癌肿瘤样本，然后将所述临床肝癌肿瘤样本置于活检组织培养基中，完成转运；S2.冻存S21.去除所述临床肝癌肿瘤样本的坏死组织、脂肪和纤维组织，然后切成1‑2mm的薄片，放在活检组织培养基中浸洗，取出，S22.每个冻存管中放入4‑6个薄片状的所述S21临床肝癌肿瘤样本的组织，S23.将1ml含有DMSO的培养基放入S22的冻存管内，室温放置30‑60min，S24.将S23的冻存管放入程序降温盒内，置于‑80℃冰箱内，进行梯度降温，1℃/min，第二天放入液氮罐，完成冻存；S3.复苏S31.从液氮罐中取出冻存管，将其放入37℃温水中2min，S32.用酒精将步骤S31的冻存管外表彻底擦拭之后，静置2min之后吸出一半的培养液，S33.向步骤S32的冻存管补充不含DMSO的培养液，混匀后静置5min，S34.弃去步骤S33的冻存管管内的培养基，补充不含DMSO的培养基，静置3min，完成复苏；S4.移植S41.取7日龄的胚蛋在钝部开窗1cm×1cm，将浸泡过0.01%多聚赖氨酸的硅胶圈放于绒毛尿囊膜上，所述硅胶圈内加入细胞外基质，将完成复苏的所述临床肝癌肿瘤样本的组织，用移液器吸取，置于硅胶圈内，S42.将完成步骤S41的胚蛋置于培养箱中继续培养，每隔24h镜检拍照，记录肝癌肿瘤生长情况，完成模型构建。