[发明专利]一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法及应用方法

摘要

本发明公开了一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法，以自然发酵的猪粪锯末堆为菌源样品，加入高温富集培养基，富集过后以刚果红选择性平板高温筛选，选择降解直径/菌落直径较大的菌株再次高温培养，以滤纸条为纤维素降解指示物，当培养基内指示物崩解，即可得到高效的高温纤维素降解菌，最后进行纯化。通过上述方法，能够有效地筛选到性能稳定的耐高温纤维素降解芽孢杆菌。本发明还公开了一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌应用方法，制成菌剂后可直接应用于猪粪发酵床，便于产业化实施，具备广阔的应用前景。

主权项

1.一种耐高温纤维素降解芽孢杆菌筛选方法，其特征在于，具体步骤为：(1)将20wt％猪粪、40wt％木屑、60wt％谷壳混合后，在60℃温度、60％湿度、pH7.5的条件下发酵二个月，得发酵猪粪锯末；(2)以所得的发酵猪粪锯末为菌源样品，取10g发酵锯末置于100mL以CMC‑Na为唯一碳源的富集培养基中，50℃、150rpm恒温培养，得富集液；(3)取100μl富集液涂布于CMC‑刚果红培养基平板上，之后于50℃培养箱中倒置恒温培养，5天后观察，平板上出现透明水解圈，选取降解直径大的菌株直接接种于放有滤纸条的富集培养基内，待培养基内滤纸条崩解，即为降解能力较强的菌株；(4)挑取少量菌株在LB固体培养基上划线直至获得单菌落，再将获得的单菌落在以CMC‑Na为唯一碳源的富集培养基上连续培养6代，待菌落形态稳定后，即得纯培菌株，得到的菌株命名为枯草芽孢杆菌SM‑5‑1(Bacillus Subtilis SM‑5‑1)，已于2018年7月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2018415。