[发明专利]一种检测猪病毒性腹泻症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒有效
| 申请号： | 201811091224.2 | 申请日： | 2018-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN109161613B | 公开（公告）日： | 2021-10-22 |
| 发明（设计）人： | 王晓杜;宋厚辉;何海健;周莹珊;刘正奎;陈琳;邵春艳;章先;程昌勇;姜胜;孙静;周彬;宋泉江 | 申请（专利权）人： | 浙江农林大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人： | 周世骏 |
| 地址： | 311304 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种检测猪病毒性腹泻症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒。该试剂盒中包括：(1)反转录和预扩增混合液：反转录和预扩增引物的序列如SEQ ID NO：1～12所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)多重连接探针混合液：其中，探针的序列如SEQ ID NO：13～24所示，通用引物的序列如SEQ ID NO：25～26所示；(3)MLPA缓冲液；(4)连接缓冲液A和B；(5)连接酶Ligase‑65；(6)PCR反应混合液，其包括序列表SEQ ID NO:25～26所示的通用引物；(7)SALSA聚合酶；(8)阴性对照；(9)阳性对照，包含6种猪病毒性腹泻症候群的病原的阳性对照质粒。与现有方法比较，本发明具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 检测 病毒性 腹泻 症候群 病原 核酸 mlpa 试剂盒 | ||
【主权项】：
1.一种检测猪病毒性腹泻症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒中包括：(1)反转录和预扩增混合液：该混合液包含反转录和预扩增引物，其序列如SEQ ID NO：1～12所示，分别用于反转录和预扩增；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)多重连接探针混合液：该混合液包括探针和通用引物；其中，探针的序列如SEQ ID NO：13～24所示，通用引物的序列如SEQ ID NO：25～26所示；(3)MLPA缓冲液；(4)连接缓冲液A和B；(5)连接酶Ligase‑65；(6)PCR反应混合液，其包括序列表SEQ ID NO:25～26所示的通用引物；(7)SALSA聚合酶；(8)阴性对照；(9)阳性对照，包含猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪delta冠状病毒、猪博卡病毒和猪诺如病毒阳性对照质粒。
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