[发明专利]一种适用于细菌的Hi-C高通量测序建库方法在审
| 申请号： | 201811087438.2 | 申请日： | 2018-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN109056078A | 公开（公告）日： | 2018-12-21 |
| 发明（设计）人： | 张骥诚 | 申请（专利权）人： | 武汉菲沙基因信息有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖高新技术开发区高新*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种适用于细菌的Hi‑C高通量测序建库方法，该方法包：(1)样品甲醛交联；(2)液氮研磨和溶菌酶并行裂解交联后物料，释放细胞染色质；细胞染色质依次经SDS灭活内源酶、经Sau3AI核酸内切酶酶切打断获得酶切后物料；SDS灭活内源酶的条件为：65℃孵育10min后立即放置冰上；(3)酶切后物料进行末端补平；(4)末端补平后DNA分子内连接；(5)解交联分子内连接后物料并去除未连接的末端生物素，获得纯化DNA，超声波随机打断DNA成利于测序的片段大小从而获得DNA测序文库。该方法通过设计合适的内源酶灭活条件，调整灭活时间和温度，从而解决了原核生物染色质偏少、互作捕获难度大的技术问题，实现了细菌的Hi‑C高通量测序建库，扩大了Hi‑C技术的适用范围。 | ||
| 搜索关键词： | 灭活 高通量测序 内源酶 建库 酶切 细胞染色质 细菌 内连接 补平 打断 核酸内切酶 测序文库 甲醛交联 液氮研磨 原核生物 超声波 解交联 染色质 溶菌酶 生物素 未连接 测序 孵育 交联 裂解 去除 捕获 并行 释放 | ||
【主权项】：
1.一种适用于细菌的Hi‑C高通量测序建库方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)对样品进行甲醛交联获得交联后的物料；(2)液氮研磨和溶菌酶并行裂解交联后物料，使裂解细胞释放细胞染色质；细胞染色质依次经SDS灭活内源酶、经Sau3AI核酸内切酶酶切打断获得酶切后物料；所述SDS灭活内源酶的条件为：65℃孵育10min后立即放置冰上；(3)用生物素标记的碱基对所述酶切后物料进行末端补平，获得末端补平后DNA；(4)对所述末端补平后DNA进行DNA细胞核分子内连接获得分子内连接后物料；(5)解交联分子内连接后物料并去除未连接的末端生物素，获得纯化的DNA，超声波随机打断DNA成利于测序的片段大小从而获得DNA测序文库。
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