[发明专利]亲和层析定量检测重组人α干扰素工艺中间体含量的方法在审
| 申请号： | 201811076860.8 | 申请日： | 2018-09-14 |
| 公开（公告）号： | CN109307771A | 公开（公告）日： | 2019-02-05 |
| 发明（设计）人： | 杨大军;茹莉莉;刘娴;吴京雷;韩志刚;程永庆 | 申请（专利权）人： | 北京三元基因药业股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68;G01N33/558;C12N15/21;C12N15/70;C07K14/56;C07K1/36;C07K1/30;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 102600 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明涉及亲和层析定量检测重组人α干扰素生产工艺中间体含量的方法，包括：1)表达重组人α干扰素的工程菌构建；2)发酵工程菌并分离纯化以可溶性蛋白或包涵体形式表达的目的蛋白。其中蛋白纯化包括粗纯和精纯，利用硫酸铵盐析沉淀获得蛋白粗品，粗品经DEAE阴离子交换柱层析纯化得到中间体，用单抗亲和层析柱定量检测中间体中重组人α干扰素的含量。本方法适于重组人α干扰素和重组集成干扰素生产工艺中间体的定量检测，优点是操作简单、快速、准确，根据得到的干扰素浓度数据可以改进人们对生产过程的认知程度和控制程度，使得可靠、快速、直接、容易地评估干扰素生产关键环节成为可能，以实现精确质量控制的目的。 | ||
| 搜索关键词： | 人α干扰素 定量检测 干扰素生产 亲和层析 粗品 干扰素 单抗亲和层析 发酵工程菌 工程菌构建 可溶性蛋白 硫酸铵盐析 蛋白纯化 分离纯化 关键环节 目的蛋白 浓度数据 生产过程 形式表达 重组集成 包涵体 质量控制 生产工艺 沉淀 蛋白 认知 评估 改进 | ||
【主权项】：
1.亲和层析定量检测重组人α干扰素生产工艺中间体含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)表达重组人α干扰素的工程菌构建；2)发酵工程菌并分离纯化以可溶性蛋白或包涵体形式表达的目的蛋白；其中，步骤2)蛋白纯化包括粗纯和精纯，利用硫酸铵盐析沉淀获得蛋白粗品，粗品经DEAE阴离子交换柱层析纯化得到中间体，用单抗亲和层析柱定量检测中间体中重组人α干扰素的含量。
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