[发明专利]一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒及检测方法

摘要

本发明涉及一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒，其包括扩增大肠杆菌H血清型H1～H12、H14～H21、H23～H49、H51～H56的PCR引物，引物序列见SEQ ID NO.1‑106，还包括H血清型分型标准物。本发明解决了现有技术中对大肠杆菌H血清型分型方法的技术要求高、不全面、耗时、耗力以及交叉反应导致的误判问题，利用本发明的试剂盒对大肠杆菌H血清型进行分型检测，使分型检测更客观、简便和准确，并可同时检测大肠杆菌53个血清型，分型效果与传统血清分型一致，检测过程操作简便，结合毛细管电泳对扩增产物进行分析，可实现大肠杆菌H血清型分型检测的自动化与高通量。

主权项

1.一种大肠杆菌H血清型分型检测试剂盒，其特征在于，包括扩增大肠杆菌H血清型H1～H12、H14～H21、H23～H49、H51～H56的PCR引物，所述扩增大肠杆菌H4血清型的PCR引物由引物H4‑PF和H4‑PR组成，引物H4‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，引物H4‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述扩增大肠杆菌H25血清型的PCR引物由引物H25‑PF和H25‑PR组成，引物H25‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，引物H25‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；所述扩增大肠杆菌H9血清型的PCR引物由引物H9‑PF和H9‑PR组成，引物H9‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，引物H9‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述扩增大肠杆菌H2血清型的PCR引物由引物H2‑PF和H2‑PR组成，引物H2‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，引物H2‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述扩增大肠杆菌H48血清型的PCR引物由引物H48‑PF和H48‑PR组成，引物H48‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，引物H48‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；所述扩增大肠杆菌H54血清型的PCR引物由引物H54‑PF和H54‑PR组成，引物H54‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示，引物H54‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；所述扩增大肠杆菌H49血清型的PCR引物由引物H49‑PF和H49‑PR组成，引物H49‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，引物H49‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示；所述扩增大肠杆菌H43血清型的PCR引物由引物H43‑PF和H43‑PR组成，引物H43‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，引物H43‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；所述扩增大肠杆菌H55血清型的PCR引物由引物H55‑PF和H55‑PR组成，引物H55‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，引物H55‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；所述扩增大肠杆菌H35血清型的PCR引物由引物H35‑PF和H35‑PR组成，引物H35‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，引物H35‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示；所述扩增大肠杆菌H45血清型的PCR引物由引物H45‑PF和H45‑PR组成，引物H45‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，引物H45‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示；所述扩增大肠杆菌H10血清型的PCR引物由引物H10‑PF和H10‑PR组成，引物H10‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，引物H10‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；所述扩增大肠杆菌H44血清型的PCR引物由引物H44‑PF和H44‑PR组成，引物H44‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，引物H44‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示；所述扩增大肠杆菌H52血清型的PCR引物由引物H52‑PF和H52‑PR组成，引物H52‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示，引物H52‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.28所示；所述扩增大肠杆菌H14血清型的PCR引物由引物H14‑PF和H14‑PR组成，引物H14‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.29所示，引物H14‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.30所示；所述扩增大肠杆菌H21血清型的PCR引物由引物H21‑PF和H21‑PR组成，引物H21‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.31所示，引物H21‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.32所示；所述扩增大肠杆菌H30血清型的PCR引物由引物H30‑PF和H30‑PR组成，引物H30‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.33所示，引物H30‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.34所示；所述扩增大肠杆菌H34血清型的PCR引物由引物H34‑PF和H34‑PR组成，引物H34‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.35所示，引物H34‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.36所示；所述扩增大肠杆菌H3血清型的PCR引物由引物H3‑PF和H3‑PR组成，引物H3‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.37所示，引物H3‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.38所示；所述扩增大肠杆菌H19血清型的PCR引物由引物H19‑PF和H19‑PR组成，引物H19‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.39所示，引物H19‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.40所示；所述扩增大肠杆菌H41血清型的PCR引物由引物H41‑PF和H41‑PR组成，引物H41‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.41所示，引物H41‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.42所示；所述扩增大肠杆菌H1血清型的PCR引物由引物H1‑PF和H1‑PR组成，引物H1‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.43所示，引物H1‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.44所示；所述扩增大肠杆菌H33血清型的PCR引物由引物H33‑PF和H33‑PR组成，引物H33‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.45所示，引物H33‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.46所示；所述扩增大肠杆菌H38血清型的PCR引物由引物H38‑PF和H38‑PR组成，引物H38‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.47所示，引物H38‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.48所示；所述扩增大肠杆菌H5血清型的PCR引物由引物H5‑PF和H5‑PR组成，引物H5‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.49所示，引物H5‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.50所示；所述扩增大肠杆菌H42血清型的PCR引物由引物H42‑PF和H42‑PR组成，引物H42‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.51所示，引物H42‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.52所示；所述扩增大肠杆菌H29血清型的PCR引物由引物H29‑PF和H29‑PR组成，引物H29‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.53所示，引物H29‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.54所示；所述扩增大肠杆菌H51血清型的PCR引物由引物H51‑PF和H51‑PR组成，引物H51‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.55所示，引物H51‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.56所示；所述扩增大肠杆菌H16血清型的PCR引物由引物H16‑PF和H16‑PR组成，引物H16‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.57所示，引物H16‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.58所示；所述扩增大肠杆菌H23血清型的PCR引物由引物H23‑PF和H23‑PR组成，引物H23‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.59所示，引物H23‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.60所示；所述扩增大肠杆菌H26血清型的PCR引物由引物H26‑PF和H26‑PR组成，引物H26‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.61所示，引物H26‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.62所示；所述扩增大肠杆菌H46血清型的PCR引物由引物H46‑PF和H46‑PR组成，引物H46‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.63所示，引物H46‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.64所示；所述扩增大肠杆菌H12血清型的PCR引物由引物H12‑PF和H12‑PR组成，引物H12‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.65所示，引物H12‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.66所示；所述扩增大肠杆菌H39血清型的PCR引物由引物H39‑PF和H39‑PR组成，引物H39‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.67所示，引物H39‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.68所示；所述扩增大肠杆菌H40血清型的PCR引物由引物H40‑PF和H40‑PR组成，引物H40‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.69所示，引物H40‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.70所示；所述扩增大肠杆菌H56血清型的PCR引物由引物H56‑PF和H56‑PR组成，引物H56‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.71所示，引物H56‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.72所示；所述扩增大肠杆菌H28血清型的PCR引物由引物H28‑PF和H28‑PR组成，引物H28‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.73所示，引物H28‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.74所示；所述扩增大肠杆菌H18血清型的PCR引物由引物H18‑PF和H18‑PR组成，引物H18‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.75所示，引物H18‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.76所示；所述扩增大肠杆菌H32血清型的PCR引物由引物H32‑PF和H32‑PR组成，引物H32‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.77所示，引物H32‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.78所示；所述扩增大肠杆菌H8血清型的PCR引物由引物H8‑PF和H8‑PR组成，引物H8‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.79所示，引物H8‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.80所示；所述扩增大肠杆菌H15血清型的PCR引物由引物H15‑PF和H15‑PR组成，引物H15‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.81所示，引物H15‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.82所示；所述扩增大肠杆菌H37血清型的PCR引物由引物H37‑PF和H37‑PR组成，引物H37‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.83所示，引物H37‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.84所示；所述扩增大肠杆菌H20血清型的PCR引物由引物H20‑PF和H20‑PR组成，引物H20‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.85所示，引物H20‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.86所示；所述扩增大肠杆菌H17血清型的PCR引物由引物H17‑PF和H17‑PR组成，引物H17‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.87所示，引物H17‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.88所示；所述扩增大肠杆菌H27血清型的PCR引物由引物H27‑PF和H27‑PR组成，引物H27‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.89所示，引物H27‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.90所示；所述扩增大肠杆菌H53血清型的PCR引物由引物H53‑PF和H53‑PR组成，引物H53‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.91所示，引物H53‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.92所示；所述扩增大肠杆菌H47血清型的PCR引物由引物H47‑PF和H47‑PR组成，引物H47‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.93所示，引物H47‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.94所示；所述扩增大肠杆菌H11血清型的PCR引物由引物H11‑PF和H11‑PR组成，引物H11‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.95所示，引物H11‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.96所示；所述扩增大肠杆菌H24血清型的PCR引物由引物H24‑PF和H24‑PR组成，引物H24‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.97所示，引物H24‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.98所示；所述扩增大肠杆菌H31血清型的PCR引物由引物H31‑PF和H31‑PR组成，引物H31‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.99所示，引物H31‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.100所示；所述扩增大肠杆菌H7血清型的PCR引物由引物H7‑PF和H7‑PR组成，引物H7‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.101所示，引物H7‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.102所示；所述扩增大肠杆菌H6血清型的PCR引物由引物H6‑PF和H6‑PR组成，引物H6‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.103所示，引物H6‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.104所示；所述扩增大肠杆菌H36血清型的PCR引物由引物H36‑PF和H36‑PR组成，引物H36‑PF的核苷酸序列如SEQ ID NO.105所示，引物H36‑PR的核苷酸序列如SEQ ID NO.106所示。