[发明专利]一种蛋白粉的电化学指纹图谱检测方法

摘要

本发明属于蛋白粉质量鉴别技术领域，特别涉及一种蛋白粉的电化学指纹图谱检测方法；本发明将蛋白粉干燥后，通过微波辅助、表面活性剂复合酶、混合溶液的使用，不仅能提高蛋白粉的酶解效率，而且还能把蛋白质酶解后生成的多肽进一步分解成氨基酸，使得蛋白粉被最大限度地分解为氨基酸，减小了在检测过程中，由于具有还原性多肽的存在，而对检测结果造成干扰现象的发生，提高了检测的准确度；在H+、BrO3‑、Mn2+和CH3COCH3组成的B‑Z电化学振荡体系混合，在恒温下测试电势变化，根据电化学指纹图谱提取的特征参数，获得丰富的信息，利用相似系统理论，将待鉴样本与标准样本进行比较，根据整体相似度鉴别待鉴样本的品种与真伪。

主权项

1.一种蛋白粉的电化学指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、建立蛋白粉化学成分的电化学指纹图谱：ⅰ、将同一品牌同一种蛋白粉不同批次的蛋白粉作为标准样品，在60‑80℃条件下，干燥1‑6h，然后自然冷却；ⅱ、准确称取0.2‑1.2g干燥冷却后的蛋白粉并置于消解罐中，并向其中加入混合溶液，再向混合溶液中加入非离子表面活性剂和复合酶，然后将消解罐置于微波消解仪中进行消解，采用功率1200W，进行第一次升温，2min内升温至25‑35℃，并在温度为35℃的条件下驻留2min；进行第二次升温，1min内由35‑50℃，并在温度为50℃的条件下驻留30‑40min；ⅲ、将消解罐从微波消解仪中取出，并将消解罐中的混合液体转至带有磁力搅拌器的恒温水浴杯中，相继加入12mL浓度为0.080mol/L的硫酸锰溶液、8mL浓度为4mol/L的硫酸溶液和5mL浓度为1mol/L的丙酮溶液作为反应底液；ⅳ、开启磁力搅拌器，调节转速为450‑600r/min，在另一个恒温水浴杯中加入10mL浓度为0.40mol/L的溴酸钾溶液，在37℃的温度下恒温静置10min后，将溴酸钾溶液倒入反应底液；ⅴ、用电化学工作站记录电压‑时间曲线，以绘制出蛋白粉的电化学指纹图谱；B、检测样品：取待检测的蛋白粉样品，使用与标准样品相同的前处理条件，得出检测样品的图谱，将两者的指纹图谱用直接观察并且以Origin软件分析作为定性依据；C、重现性考察：取待检测的蛋白粉样品，测定其图谱，测得的电化学指纹图谱的各种特征参数的RSD＜3％，表明所述方法具有很好的重现性；进一步，所述电化学指纹图谱法包括如下步骤：A‑1、标准样品选择：同一产地同一品牌的蛋白粉，以4‑8个批次为标准样品；A‑2、电化学指纹图谱法分析条件：检测仪器：瑞士万通204N型电化学工作站，TRANSFORM800微波消解仪、HH‑501型超级恒温水浴锅，85‑2A型数显恒温磁力搅拌器，213型金属铂电极和217型甘汞电极；A‑3、电化学指纹图谱信息参数分析：用Origin软件绘制电压‑时间（E‑t）曲线，即获得蛋白粉电化学指纹图谱以及其特征参数；其中，图谱参数包括：诱导时间(s)：从加入试剂到振荡发生的时间；振荡寿命(s)：振荡开始到振荡结束的时间；最大振幅(v)：振荡过程中相邻电位正峰和负峰之间的最大差值；振荡周期(s)：振荡过程中出现相邻峰的时间；最高电位(v)；振荡曲线的电位最高值；最低电位(v)；振荡曲线的电位最低值；平衡电位(v)；体系达到热力学平衡时的电位；测得的电化学指纹图谱的各种特征参数的RSD＜3％；B、检测样品：取待检测的蛋白粉样品，使用与标准样品相同的条件检测，得出检测样品的指纹图谱，将两者的指纹图谱直接观察并且以Origin软件分析作为定性依据，如果两者的图谱特征参数的RSD＜10％，可认为是同一产品，若RSD＞10％则认为是非同一产品；C、重现性考察：取6份待测蛋白粉样品，测定其图谱并进行考察。