[发明专利]一种低能N+离子注入诱变长柄木霉高产蛋白酶的方法在审
| 申请号： | 201811010797.8 | 申请日： | 2018-08-31 |
| 公开（公告）号： | CN109161541A | 公开（公告）日： | 2019-01-08 |
| 发明（设计）人： | 徐双贵;胡培;李垒 | 申请（专利权）人： | 安徽省新康饲料有限公司 |
| 主分类号： | C12N13/00 | 分类号： | C12N13/00;C12N15/01;C12N9/58;C12R1/885 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 230000 安*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种低能N+离子注入诱变长柄木霉高产蛋白酶的方法，涉及生物工程技术领域。包括：将原产酸性蛋白酶的长柄木霉菌株接种在固体发酵平板培养基上；取平板培养基上的长柄木霉菌株利用稀释分离法进行分离纯化；用接种环取在斜面培养基上取长柄木霉孢子，加入无菌水中进行稀释；取孢子悬液均匀涂布于空的无菌培养皿中，然后放入离子注入机的靶室进行离子注入；选取生长状况良好的菌株接种到种子培养基上；将上述选取的菌株接种至发酵液培养基中进行培养。本发明通过不同的营养培养基进行多次培养及分离提纯，同时还使用低能氮离子注入，提高了长柄木霉的酸性蛋白酶的产量，同时获得酸性蛋白酶还具有耐高温性能。 | ||
| 搜索关键词： | 长柄木霉 酸性蛋白酶 离子 蛋白酶 平板培养基 菌株接种 木霉菌株 长柄 诱变 生物工程技术领域 发酵液培养基 高产 离子注入机 耐高温性能 无菌培养皿 稀释分离法 斜面培养基 营养培养基 种子培养基 分离纯化 分离提纯 固体发酵 均匀涂布 生长状况 孢子悬液 氮离子 接种环 孢子 靶室 放入 水中 无菌 稀释 接种 | ||
【主权项】：
1.一种低能N+离子注入诱变长柄木霉高产蛋白酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、将原产酸性蛋白酶的长柄木霉菌株接种在固体发酵平板培养基上，28℃培养3‑5天，连续活化3次备用；步骤2、取平板培养基上的长柄木霉菌株利用稀释分离法进行分离纯化；并取纯化后的长柄木霉菌株接种到斜面培养基上进行摇瓶培养2‑4天；步骤3、用接种环取在斜面培养基上取长柄木霉孢子，加入无菌水中进行稀释成长柄木霉孢子数量浓度为4000‑6000个/ml的孢子悬液；步骤4、取孢子悬液均匀涂布于空的无菌培养皿中，用无菌风吹干，然后放入离子注入机的靶室进行离子注入，注入完毕后用无菌水洗脱，涂布于活化平板上；步骤5、选取生长状况良好的菌株接种到种子培养基上，培养3‑5天后在种子培养基表面倾注一层牛奶；选取产生的透明圈直径与菌落直径之比较大的菌株；步骤6、将上述选取的菌株接种至发酵液培养基中进行培养8‑15天，发酵培养结束后测量酶的活性；选取酶活性高的菌株再次接种至种子培养基上培养所得菌株即为高产耐高温酸性蛋白酶的长柄木霉。
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