[发明专利]一种羊毛角蛋白皮质细胞的制备方法

摘要

本发明提供了一种羊毛角蛋白皮质细胞的制备方法，属于羊毛角蛋白皮质细胞提取领域。本方法先用次氯酸钙/过氧化氢预处理羊毛，剥除羊毛表面鳞片层；之后用L‑半胱氨酸作还原剂，并胰蛋白酶催化及CMC降解羊毛纤维，来分离羊毛皮质细胞；然后采用超声波处理进一步分离皮质细胞；最后过滤、抽滤滤液得到皮质细胞，并将皮质细胞进行冷冻、冻干处理，得到羊毛角蛋白皮质细胞。本发明作用的方法是高效的、环境友好的。

主权项

1.一种羊毛角蛋白皮质细胞的制备方法，其特征在于，步骤如下：步骤一、采用次氯酸钙/过氧化氢联合去除羊毛表面鳞片层：(1)将羊毛浸渍在20‑25℃的水中，固液比为1:20‑25，把羊毛彻底浸湿，加入活性氯含量为70％的次氯酸钙Ca(ClO)2·3H2O，静置5‑10分钟，得到体系A；其中次氯酸钙的添加量是羊毛质量的3‑5％；(2)向体系A中缓慢加入质量分数为30％的过氧化氢、作为过氧化物稳定剂的焦磷酸钠、作为过氧化物螯合剂的乙二胺四乙酸，形成体系B；在30‑50℃的恒温条件下处理15‑30分钟，使羊毛与次氯酸盐和过氧化物进行反应；其中，以体系A中溶液的体积计，质量分数为30％的过氧化氢的添加量为10‑14ml/L，焦磷酸钠的添加量为1‑2g/L，乙二胺四乙酸的添加量为1‑2g/L；(3)向体系B中添加亚硫酸钠和质量分数为88％的甲酸，再将pH值调整至3‑4，在40‑50℃的条件下处理10‑20分钟，确保亚硫酸盐离子完全还原体系B中的过氧化物，得到体系C；其中，亚硫酸钠的添加量是羊毛质量的4‑7％，质量分数为88％的甲酸的添加量以体系B中溶液的体积计，为1‑2ml/L；(4)逐渐冷却体系C，将处理后的羊毛进行漂洗，并自然风干，得到去鳞片层羊毛样品；步骤二、L‑半胱氨酸/胰蛋白酶联合处理去鳞片层羊毛样品，定向去除细胞间质，分离皮质细胞，具体过程为：将0.15‑0.17mol/L的L‑半胱氨酸溶液、去鳞片层羊毛样品和胰蛋白酶混合，形成体系D，在反应温度为30‑40℃下，处理20‑30h，确保去除细胞间质；其中，去鳞片层羊毛样品与溶液D的质量比为1:25‑30，胰蛋白酶与去鳞片层羊毛样品的质量之比为1:10‑15；步骤三、对反应后的体系D进行超声波处理，分离皮质细胞，超声波处理的温度为50‑70℃，超声功率400‑500W，在工作2s，间隔2s的处理参数下处理20‑40min；步骤四、用120目分样筛网将超声波处理后的溶液进行过滤，去除羊毛纤维状杂质，收集得到滤液；步骤五、采用孔径为0.45微米的滤膜，对收集的滤液进行抽滤，将固体和液体分离开，未能透过滤膜的固体成分即为羊毛角蛋白皮质细胞；步骤六、将获得的羊毛角蛋白皮质细胞迅速放入‑80℃低温烘箱中冷冻2‑6h；步骤七、将结冰的羊毛角蛋白皮质细胞进行真空冷冻干燥10‑30h，得到最终的羊毛角蛋白皮质细胞。