[发明专利]一种针对磺胺类抗生素特异性降解的试剂的制备方法

摘要

本发明涉及抗生素降解技术领域，尤其涉及一种针对磺胺类抗生素特异性降解的试剂的制备方法，包括二甲基异咯嗪的合成、一次纯化、二次纯化、小球藻蛋白液的提取、蛋白液的纯化、试剂的复配。本发明以光色素二甲基异咯嗪为磺胺类抗生素检测探针，可高效定位磺胺类抗生素，提高针对磺胺类抗生素特异性降解的效率，同时试剂释放的小球藻蛋白液可有效针对磺胺类抗生素的苯环结构进行断裂，将磺胺类抗生素降解为醛、醇等物质，从而针对性的对其完成降解消除。

主权项

1.一种针对磺胺类抗生素特异性降解的试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)二甲基异咯嗪的合成：将1.0～1.2g干燥的6，7二甲基‑9‑甲酸基甲基异咯嗪固体置于烧杯内，加入30～32mL 0.10～0.12M的硼酸溶液和130～135mL 0.1～0.12M的氢氧化钠溶液，避光搅拌反应90～100min，得二甲基异咯嗪反应液；(2)二甲基异咯嗪的一次纯化：过滤二甲基异咯嗪反应液，将滤液中加入萃取剂萃取，反复萃取直至萃取液为无色；在38～40℃温度下用旋转蒸发仪对萃取液旋转蒸发进行浓缩，浓缩液终体积为18～20mL；(3)二甲基异咯嗪的二次纯化：对浓缩液做薄层层析分离，薄层厚度为0.18～0.25mm，通过凝胶成像仪观察荧光，再用柱层析分离浓缩液，层析后得到二甲基异咯嗪的溶液，在70～74℃旋转蒸发，得到浓缩液，以55～58℃干燥得到浅黄色二甲基异咯嗪固体粉末；(4)小球藻蛋白液的提取：将小球藻在2～4℃、6000～8000r/min条件下离心浓缩8～10min，将浓缩液于超声破碎仪中进行细胞破壁，破碎后所得液体置于2～4℃、10000～13000r/min条件下离心15～20min，取上清液，即为粗蛋白液；(5)蛋白液的纯化：将粗蛋白液置于饱和硫酸铵溶液中，经DEAE Sepharose Fast Flow层析柱，用氯化钠缓冲液梯度洗脱，合并具有酶活的洗脱液，在0～4℃温度下，以磷酸缓冲溶液透析过夜，得纯化后的蛋白液；(6)试剂的复配：在纯化后的蛋白液中加入50～55mg十二烷基硫酸钠、0.5～0.6g步骤(3)所得的二甲基异咯嗪固体粉末，搅拌均匀，静置30～45min，1:1加入稳定剂，即得针对磺胺类抗生素特异性降解的试剂。