[发明专利]一种提高4-α-糖基转移酶可溶性表达水平的方法有效
| 申请号： | 201810825284.6 | 申请日： | 2018-07-25 |
| 公开（公告）号： | CN108998431B | 公开（公告）日： | 2019-07-23 |
| 发明（设计）人： | 段绪果;张心怡;周烽华;曹佳睿;沈镇炎 | 申请（专利权）人： | 南京林业大学 |
| 主分类号： | C12N9/10 | 分类号： | C12N9/10;C12P19/04 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 210000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种提高4‑α‑糖基转移酶可溶性表达水平的方法，属于发酵工程技术领域。本发明的方法从4‑α‑糖基转移酶的发酵生产工艺入手，通过在4‑α‑糖基转移酶生产菌株的发酵培养基中添加一定量的氧化三甲胺和/或脯氨酸，以提高其对4‑α‑糖基转移酶的表达水平；采用本发明的方法发酵48h，可成功将细胞破碎上清液中的4‑α‑糖基转移酶酶活提高至1302.6U/mL；且本发明的方法具有工艺简单易行，适合工业化生产的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 糖基转移酶 可溶性表达 发酵工程技术 发酵生产工艺 发酵培养基 表达水平 生产菌株 细胞破碎 脯氨酸 三甲胺 上清液 酶活 发酵 成功 | ||
【主权项】：
1.一种提高4‑α‑糖基转移酶可溶性表达水平的方法，其特征在于，所述方法为使用添加了氧化三甲胺或脯氨酸的发酵培养基进行发酵培养，所述氧化三甲胺在发酵培养基中的添加量为0.5～10g/L，所述脯氨酸在发酵培养基中的添加量为0.5～5g/L，所述发酵培养基的成分包含甘油4～10g/L、蛋白胨0.5～3g/L、酵母粉0.5～5g/L、KH2PO4 5～15g/L、(NH4)2HPO4 1～6g/L、柠檬酸0.5～4g/L、MgSO4 0.2～1.5g/L以及微量元素液5～20mL/L，所述发酵培养所用的生产菌株为可产4‑α‑糖基转移酶的菌株，所述微量元素液的成分为FeSO4·7H2O 5～20g/L、ZnSO4·7H2O 1.5～5g/L、CuSO4·5H2O 0.5～2g/L、MnSO4·4H2O 0.2～1.0g/L、Na2B4O7·10H2O 0.1～0.5g/L、CaCl2 0.5～5g/L、(NH4)6Mo7O2 5～50g/L。
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