[发明专利]一种微生物生化需氧量的测定传感器制备方法

摘要

本发明提供了一种微生物生化需氧量的测定传感器制备方法。本发明利用滴涂法将科琴黑分散液负载到工作电极表面，待其干燥后再将细菌纤维素/酵母/甲萘醌混合液负载滴涂于到科琴黑修饰后的工作电极上，形成一种载体覆膜。载体覆膜不仅能够将酵母固定于工作电极上，也能防止科琴黑在测试过程中脱落，形成了一种对水体中的有机物有响应的薄膜。然后利用电极表面的固定化微生物对有机物进行氧化分解，通过电化学测试方法进行测定。本发明利用科琴黑作为导电剂；利用细菌纤维素不但包埋固定了酵母，也防止科琴黑在测试过程中发生脱落，提高了测试的稳定性。本发明制备得到的微生物BOD传感器操作简便、成本低廉、快速准确。

主权项

1.一种微生物生化需氧量的测定传感器制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将玻碳电极在麂皮上顺次用1μm、0.3μm、0.05μm的氧化铝抛光粉打磨，然后依次用超纯水、无水乙醇分别超声洗涤5min，使玻碳电极表面形成光滑的镜面，而后浸泡在无水乙醇中，得到预处理的玻碳电极；2)以去离子水为分散介质，配制浓度为0.5～2.5mg/ml的科琴黑分散液，用移液枪取5μl上述科琴黑分散液滴涂于步骤1)中所得的玻碳电极上，室温下干燥，得到科琴黑修饰的玻碳电极；3)将酿酒酵母冻干粉分散于4wt％葡萄糖溶液中，在恒温摇床中复水活化30min，控制摇床转速为180rpm，温度为37℃；将活化好的酿酒酵母用0.01M的PBS缓冲液洗涤两次，其中PBS缓冲液pH＝7；并用0.01M的PBS缓冲液调节酿酒酵母分散液的浓度为2mg/ml，得到适用的酵母分散液；4)取适量步骤3)中所得的酵母分散液，用移液枪缓慢加入适量20mM的甲萘醌/乙醇溶液，并确保最终混合液中甲萘醌的浓度为0.2mM，最后搅拌30min，得到适用的酵母/甲萘醌混合液；5)将细菌纤维素分散液稀释至0.02～0.24wt％，并通过机械搅拌使分散液保持均匀；将步骤4)中的酵母/甲萘醌混合液用移液枪缓慢滴加于细菌纤维素分散液中，边滴加边机械搅拌，并控制细菌纤维素分散液与酵母/甲萘醌混合液的体积比为1:1，搅拌10min，得到细菌纤维素/酵母/甲萘醌混合液；6)用移液枪取20ul步骤5)中的细菌纤维素/酵母/甲萘醌混合液滴涂于步骤2)中所得的玻碳电极上，于4℃下低温干燥12h，最终制得以细菌纤维素固定化酵母作为敏感元件的微生物生化需氧量测定传感器。