[发明专利]一种高载量固定化扁桃酸消旋酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种高载量固定化扁桃酸消旋酶的制备方法。具体步骤如下：1)葡聚糖接枝型琼脂糖介质的制备；2)介质的活化；3)介质的溴代醇化；4)介质偶联亚氨基二乙酸；5)介质螯合二价金属离子；6)固定化扁桃酸消旋酶。本发明利用葡聚糖分子带有很多羟基的特点，制备螯合金属离子的葡聚糖接枝型琼脂糖介质来固定化扁桃酸消旋酶，提高消旋酶载量。本发明制得的固定化消旋酶对温度、pH的耐受性及操作稳定性均优于以螯合金属离子的葡聚糖未接枝型琼脂糖微球为介质得到的固定化消旋酶。

主权项

1.一种高载量固定化扁桃酸消旋酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)取10mL抽干的琼脂糖介质，加入25mL二甲基亚砜、50mL环氧氯丙烷、10mL 200mg/mL葡聚糖溶液及25mL去离子水，30℃下，150rpm水浴摇床中反应1h，再加入2g NaOH，50℃下，150rpm水浴摇床中反应2h，用去离子水洗涤，得到葡聚糖接枝型琼脂糖介质；2)取步骤1)得到的葡聚糖接枝型琼脂糖介质，加入2.5g NaOH、10mL 20％(v/v)二甲基亚砜以及5mL烯丙基溴，25℃下，150rpm水浴摇床中反应24h，用去离子水洗涤得到烯丙基溴活化的葡聚糖接枝型琼脂糖介质，即活化介质；3)取步骤2)得到的活化介质，加入0.801g N‑溴代丁二酰亚胺、12mL丙酮和10mL去离子水，于25℃下，150rpm水浴摇床中反应1h，用去离子水洗涤，得到溴代醇化的葡聚糖接枝型琼脂糖介质，即溴代醇化介质；4)取步骤3)得到的溴代醇化介质，加入50mL含1.0mol/L亚氨基二乙酸、2.0mol/L Na2CO3和0.04mol/L NaBH4溶液，60℃下，150rpm水浴摇床中反应24h，用去离子水洗涤，得到偶联亚氨基二乙酸的葡聚糖接枝型琼脂糖介质，即亚氨基二乙酸偶联介质；5)取步骤4)得到的亚氨基二乙酸偶联介质，加入50mL 0.1mol/L二价金属离子盐溶液，25℃下，150rpm水浴摇床中反应3h，用去离子水洗涤，得到螯合二价金属离子的葡聚糖接枝型琼脂糖介质，即金属离子螯合介质；6)取步骤5)得到的金属离子螯合介质，加入50mL含有扁桃酸消旋酶的粗酶液，4℃下，150rpm水浴摇床中反应1h，用去离子水洗涤，得到高载量固定化扁桃酸消旋酶。