[发明专利]一种重组禽流感病毒的工业化纯化方法

摘要

本发明公开了一种重组禽流感病毒的工业化纯化方法，包括以下步骤：预处理冻融、沉淀浓缩提清、碟式离心机连续离心、澄清过滤和超滤浓缩。由于采用了上述技术方案，本发明具有以下有益效果：本发明絮凝剂的使用，使重组禽流感病毒以沉淀提清这种温和的方法进行了初步的5‑10倍浓缩；避免使用管式离心机对病毒照成剪切力的损伤；沉淀阶段除去大量的杂蛋白，有效的提升了滤芯的通量降低；超滤阶段加入钝化剂，增加了超滤浓缩倍数，提升了病毒的纯度；工业化生产容易实现；通过血凝试验检测病毒浓缩液HA效力提升8倍‑10倍；通过灭活低温保存用于禽流感灭活疫苗的生产。

主权项

1.一种重组禽流感病毒的工业化纯化方法，其特征在于，包括以下步骤一、预处理冻融：对收获检测合格的重组禽流感病毒细胞培养液进行低温‑15℃冷库冷冻48小时后，2‑8℃循环水池解冻，再次‑15℃冷库冷冻48小时，2‑8℃循环水池解冻两次冻融；二、沉淀浓缩提清：将经过二次冻融后的重组禽流感病毒细胞培养液导入沉淀提清罐，无菌加入6.6 %病毒液絮凝剂A，10%絮凝剂B充分搅拌30分钟，0.1摩尔NaOH溶液调整混合液pH值至7.6，4℃沉淀罐中静止2小时沉淀，提取上清液；三、碟式离心机连续离心：将上清液经12000G的碟式离心机恒压连续离心，测试浊度达到40NTU即可进行澄清过滤；四、澄清过滤：将离心后重组禽流感病毒液导入澄清过滤器进行0.45μm膜过滤；五、超滤浓缩：将过滤后的重组禽流感病毒液与含1‰吐温‑80的0.2MPBS，1:4混合30分钟，300KD中控纤维超滤浓缩10倍收获浓缩病毒液。