[发明专利]一种直扩RPA现场可视化检测方法在审
| 申请号： | 201810447842.X | 申请日： | 2018-05-11 |
| 公开（公告）号： | CN108359717A | 公开（公告）日： | 2018-08-03 |
| 发明（设计）人： | 赵凯;范小瑞;赵笑;杜亚楠;张琪;张晓霞;吴文静;张皖静;赵庆;史斌;赵桓震;赵斌安;潘磊 | 申请（专利权）人： | 上海市农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/6895;C12Q1/689;C12Q1/14;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海开祺知识产权代理有限公司 31114 | 代理人： | 崔兆慧;费开逵 |
| 地址： | 201106 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 一种直扩RPA现场可视化检测方法，包括如下步骤：1)粗提待测样品基因组DNA；2)针对目的基因设计RPA特异性引物；3)将RPA特异性引物加入到RPA反应体系中进行RPA扩增反应，所述RPA反应体系中成分的终浓度为：外引物F 0.12‑0.48μM，内引物R 0.12‑0.48μM，dNTPs1.4‑1.8mM，MgOAc 8.4‑14mM，模板DNA 1～2μL；反应程序：32‑42℃，5‑10min；4)鉴定扩增结果：向扩增产物中加入SYBR Green I染料，直接在日光灯或者阳光下观察颜色变化：显色为绿色的样品为阳性；显色为橘色的样品为阴性。本发明可应用于来源于动物、植物、微生物的所有基因进行RPA检测，对RPA扩增产物实现了快速、简便、可视化鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 可视化检测 特异性引物 扩增产物 显色 日光灯 基因组DNA 待测样品 反应程序 扩增反应 目的基因 颜色变化 模板DNA 可视化 内引物 外引物 染料 粗提 扩增 阴性 橘色 微生物 基因 检测 观察 应用 | ||
【主权项】：
1.一种直扩RPA现场可视化检测方法，包括如下步骤：1)粗提待测样品基因组DNA；2)针对目的基因设计用于RPA检测的特异性引物，所述特异性引物包括外引物F和内引物R；3)将步骤1)粗提的基因组DNA作为模板，步骤2)设计的RPA特异性引物加入到RPA反应体系中，进行RPA扩增反应；所述RPA反应体系包含外引物F、内引物R、dNTPs、MgOAc、模板DNA，成分的终浓度为：外引物F 0.12‑0.48μM，内引物R 0.12‑0.48μM，dNTPs 1.4‑1.8mM，MgOAc 8.4‑14mM，模板DNA 1～2μL；RPA扩增反应程序为：32‑42℃，5‑10min；RPA扩增反应程序中反应温度优选36‑42℃；4)鉴定扩增结果步骤3)RPA扩增反应结束后，向扩增产物中加入SYBR Green I染料，直接在日光灯或者阳光下观察颜色变化：显色为绿色的样品为阳性；显色为橘色的样品为阴性。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海市农业科学院，未经上海市农业科学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201810447842.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
