[发明专利]一种促进肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞增殖的方法

摘要

本发明属于细胞治疗技术领域肝癌细胞技术领域，具体为一种促进肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞增殖的方法。将肝癌细胞培养至80％融合，再进行传代培养，选用生长良好的传代细胞，用含有载虾青素海藻酸钙微球的细胞培养液培养细胞，最后进行实验组和对照组的细胞增殖、细胞凋亡及Real‑time PCR实验对比检测。在虾青素的干预下，肝癌细胞有明显的凋亡现象，且肝癌细胞增殖明显受到抑制，并且使肝癌细胞代谢过程中的糖酵解过程及三羧酸循环过程发生改变，总体表现出更强的抑制肝癌细胞增殖的功能。

主权项

1.一种促进肝癌细胞凋亡和抑制肝癌细胞增殖的方法，其特征在于，该方法将肝癌细胞培养至80％融合，再进行传代培养，选用生长良好的传代细胞，用含有载虾青素海藻酸钙微球的细胞培养液培养细胞，最后进行实验组和对照组的细胞增殖、细胞凋亡及Real‑time PCR实验对比检测；步骤如下：(1)肝癌细胞的培养将原代肝癌细胞培养至80％融合，用含0.25g/100mL EDTA的胰蛋白酶液进行消化，重悬肝癌细胞，然后接种到培养皿中进行传代培养，选取传代细胞中状态优良的细胞进行实验；(2)虾青素对肝癌细胞活性的干预首先利用双乳液法制备载虾青素海藻酸钙微球，以改善虾青素水溶性，同时使虾青素的稳定性得到提升，保护抗癌活性；将载虾青素微球按照不大于40μM超声溶解入肝癌细胞培养基中，用肝癌细胞培养基培养细胞1‑16天，用虾青素对肝癌细胞活性进行干预；(3)肝癌细胞增殖动力学测试及凋亡测试虾青素干预完成后，以未干预的肝癌细胞作同期对照，用计数法记录虾青素干预后肝癌细胞的死亡率；在凋亡试剂盒的辅助下，用流式细胞仪测试肝癌细胞凋亡率；(4)肝癌细胞代谢相关酶的表达利用Real‑time PCR方法分别对经过虾青素干预后的肝癌细胞以及相应对照组进行对比实验，对二者糖酵解过程中的PKM2、LDHA以及三羧酸循环过程中的PDHA1、SDHA的mRNA表达水平进行检测。