[发明专利]一种ADP配基层析介质的保护方法

摘要

本发明属于亲和层析技术领域，提供一种ADP配基层析介质的保护方法。向硫氧还蛋白还原酶TrxR粗酶液中加入螯合剂，螯合粗酶液中的Mg²⁺，抑制DNase活性，保护ADP配基。用TE缓冲液平衡2’5’ADP Sepharose亲和层析柱，将含有螯合剂的TrxR粗酶液加入柱子中使TrxR与ADP配基结合，采用TE缓冲液清洗非特异性结合在柱子上的杂蛋白，再采用TE+0.5M NaCl洗脱与ADP配基结合的TrxR，用再生缓冲液处理对柱子进行再生后，立即用TE缓冲液平衡再生后的柱子。本发明操作方法简单、螯合剂廉价易得，经济成本低；对ADP配基保护作用显著，实用性强。

主权项

1.一种ADP配基层析介质的保护方法，其特征在于以下步骤：(1)待纯化样品的预处理向硫氧还蛋白还原酶TrxR粗酶液中加入螯合剂，使粗酶液中螯合剂的终浓度为10‑50mM，螯合粗酶液中的Mg²⁺，抑制DNase活性，保护ADP配基；所述的螯合剂能与Mg²⁺结合；(2)按照2’5’ADP Sepharose亲和层析柱使用说明操作，用TE缓冲液平衡柱子，将步骤(1)得到的含有螯合剂的TrxR粗酶液加入柱子中使TrxR与ADP配基结合，采用TE缓冲液清洗非特异性结合在柱子上的杂蛋白，再采用TE+0.5M NaCl洗脱与ADP配基结合的TrxR，用再生缓冲液处理对柱子进行再生后，立即用TE缓冲液平衡再生后的柱子。