[发明专利]伪狂犬病病毒基因组Fosmid文库、构建方法及其在构建突变体中的应用有效
| 申请号： | 201810374527.9 | 申请日： | 2018-04-24 |
| 公开（公告）号： | CN108754616B | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 仇华吉;周末;孙元 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心) |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C40B40/06;C12N7/01 |
| 代理公司： | 北京思元知识产权代理事务所(普通合伙) 11598 | 代理人： | 余光军;霍雪梅 |
| 地址： | 150069 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明公开了伪狂犬病病毒(PRV)基因组Fosmid文库、构建方法及其在构建PRV突变体中的应用。本发明构建了PRVTJ株基因组Fosmid文库，从中选取了10组能覆盖完整PRV基因组且相互有重叠区域的5粘粒系统，从中筛选出5组可拯救出完整PRV的粘粒并鉴定出最佳粘粒组合，应用该粘粒组合构建了与VP26融合表达EGFP的重组PRV，该报告病毒与亲本病毒在滴度与生长特性上无差异。本发明将庞大的PRV基因组分成几个小片段构建Fosmid文库，提高了文库的稳定性，同时使PRV基因的改造和修饰更加简单、方便，缩短了构建文库的周期。本发明为对PRV基因组进行快速、准确修饰及构建重组疫苗等奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 狂犬病 病毒 基因组 fosmid 文库 构建 方法 及其 突变体 中的 应用 | ||
【主权项】：
1.一种伪狂犬病病毒基因组Fosmid文库的构建方法，其特征在于，包括：(1)提取伪狂犬病病毒基因组DNA；(2)将伪狂犬病病毒基因组DNA片段末端补平修饰后与pCC1FOS载体连接获得重组DNA；(3)将重组DNA包装后感染大肠杆菌获得粘粒；(4)筛选用于拯救病毒的粘粒组合得到涵盖伪狂犬病病毒全长基因组的Fosmid文库。
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