[发明专利]耐盐耐冷氨氧化细菌的生产方法及应用

摘要

本发明涉及一种耐盐耐冷氨氧化细菌的生产方法及应用。其特征是首先筛选出高效氨氧化细菌，然后对氨氧化细菌进行耐盐驯化得到耐盐氨氧化细菌；进一步再对上述耐盐氨氧化细菌进行耐冷性驯化，得到耐盐耐冷氨氧化细菌。本发明首次提出的耐盐耐冷氨氧化细菌的生产方法其优点在于：操作简单、成本低，培养出的耐盐耐冷氨氧化细菌，不但能应用于自然水体中，且能规模化生产耐盐耐冷氨氧化细菌。该细菌能同时克服普通氨氧化细菌对盐度高和温度低环境的敏感，在温度为10℃，盐度为30‰的环境下，25天后，氨氮浓度从3.6mg/L降低至0.25mg/L。

主权项

1.耐盐耐冷氨氧化细菌的生产方法，其特征是首先筛选出高效氨氧化细菌，然后对氨氧化细菌进行耐盐驯化得到耐盐氨氧化细菌；进一步再对上述耐盐氨氧化细菌进行耐冷性驯化，即得耐盐性耐冷氨氧化细菌；所述高效氨氧化细菌的筛选方法，包括如下步骤：（1）富集培养：称取干重10g‑20g的沉积物，加入到一个盛有100mL富集培养基的250mL锥形瓶中，于150r/min‑200r/min，28℃‑30℃的条件下震荡培养数天后吸取10mL至另一个富集培养基中，于上述条件震荡培养数天，如此重复上述步骤3次以提高氨氧化细菌的浓度，最终得到氨氧化细菌富集液；上述富集培养基为：(NH4)2SO4 5.5g，CaCO3 5.5g，NaCl 2.0g，MgSO4 0.5g，K2HPO4 1.5g，MnSO4 0.01g，FeSO4 0.02g，蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=8.0，121℃灭菌30min；（2）纯化分离：将上述氨氧化菌富集液按10‑1‑10‑7梯度进行稀释，涂布在固体培养基上，于28℃‑30℃培养数天，待菌落长成后，挑选不同形态的菌落在另一个固体培养基上进行反复划线，直到生成的菌落为不同种单一形态的单一菌，分离得到多株纯种氨氧化细菌，上述培养基为：NH4SO4 2g，NaH2PO4 0.25g，MgSO4·7 H2O 0.03g，MnSO4·4H2O 0.01g，K2HPO4 0.75g，NaCl 0.01g，CaCO3 5g，琼脂 20g蒸馏水1000mL，5%Na2CO3调节pH=7.2，121℃灭菌30min；上述氨氧化细菌的耐盐性耐冷驯化方法，包括如下步骤：首先耐盐性驯化：将上述分离得到多株纯种氨氧化细菌挑取到一个富集培养基中于150r/min‑200r/min，28℃‑30℃的条件下震荡培养数天，分别得到单菌株富集液；待上述各单菌株富集液进入对数增长期时，以各单菌株富集液与富集培养基5%的接种量依次接种于另一个100mL盐度为5‰、10‰、15‰和20‰的富集培养基中，于150r/min‑200r/min，28℃‑30℃的条件震荡培养数天，筛选出对氨氮降解效果好的氨氧化细菌即为耐盐氨氧化细菌；之后进行耐冷性驯化：即将上述筛选出的耐盐氨氧化细菌以富集液与富集培养基5%的接种量接种到一个100mL盐度为20‰的富集培养基中，依次于25℃、20℃、15℃和10℃，150r/min‑180r/min的条件下震荡培养数天，筛选出对氨氮降解效果好的氨氧化细菌即为耐盐耐冷氨氧化细菌。