[发明专利]一种高效的山桐子组织培养快繁方法

摘要

本发明公开了一种高效的山桐子组织培养快繁方法，涉及分子生物学实验中植物组织培养技术。本方法包括如下步骤：①外植体消毒；②新生芽诱导；③芽苗诱导；④壮苗；⑤根的诱导；⑥炼苗及移栽。本发明具有下列优点和积极效果：①能将经选育的高产、高含油率的山桐子株系通过组织培养快速繁殖获得大量种苗；②本发明的优点在于整个培养周期时间短，仅需2～3个月，扩繁系数高且可重复利用每代切除的基部进行下一代增殖，生根繁密健壮易于成活，炼苗成活率高；③可提供具有稳定优良遗传性状、且无病毒和病原菌积累的大量种苗，从而为山桐子规模化种植并推动山桐子整个产业链的发展奠定基础。

主权项

1.一种山桐子组织培养快繁方法，其特征在于包括下列步骤：①外植体消毒用于新生芽诱导的外植体为扦插苗或含冬芽的成年树枝条的侧芽或顶芽部分；外植体植株首先放置于洁净室内环境2～5天，然后剪取外植体用0.2%新洁尔灭浸泡1～3h，75%酒精消毒30～45秒2次，再用0.1%升汞溶液+几滴洗洁精消毒6～16分钟，再使用无菌水冲洗5次以上；②新生芽诱导新生芽诱导所用的培养基为：MS + 0.5～1.0mg/L 6BA + 0.03～0.2mg/L IAA + 0.03～0.1mg/L GA3，蔗糖浓度为3.5%；③芽苗诱导芽苗诱导所用的培养基为：芽分化所用培养基为：B5 + 0.2～1.0mg/L + 0.01～0.05mg/L IAA + 0.01～0.05mg/L TDZ，蔗糖浓度为3.5%；④壮苗壮苗所用培养基为：MS + 0.2～0.8mg/L 6BA + 0.03～0.1mg/L IAA + 0.2～0.8mg/L Tiba + 200mg/L CA，蔗糖浓度为3.5%，将诱导的芽苗切成小块，切面朝下接种于培养基上；⑤根的诱导根的诱导所用培养基为：1/2MS + 0.5～1.0mg/L IBA + 0.1～0.2mg/L IAA + 200mg/L CA，蔗糖浓度为3%；⑥炼苗及移栽炼苗用土：泥炭：椰砖：蛭石=1：1：1，高温高压灭菌后混匀，分装，待晾干后使用；组织培养苗开盖放置3天，将其移植入炼苗土中，根分化部位裸露在外，保持空气湿度80%，散射光，25±3℃培养至有新芽萌发后，移入大棚或温室。