[发明专利]一种DNA长度可控片段化方法及其在构建文库中的应用在审
| 申请号： | 201810239733.9 | 申请日： | 2018-03-22 |
| 公开（公告）号： | CN108486100A | 公开（公告）日： | 2018-09-04 |
| 发明（设计）人： | 吴雅坤;林振华 | 申请（专利权）人： | 苏州泰康吉安仪器科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C40B50/06 |
| 代理公司： | 常州佰业腾飞专利代理事务所(普通合伙) 32231 | 代理人： | 张文杰 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市相城经济*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种DNA长度可控片段化方法及其在构建文库中的应用，可用于cDNA与双链DNA的可控片段化，及其文库的构建。在单链cDNA分子片段化中，通过向合成与RNA模板互补的cDNA链的反转录反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的cDNA；在双链DNA分子的片段化中，通过向合成双链DNA的PCR反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的双链DNA；在所述cDNA与双链DNA上的dU碱基处进行酶处理，断裂DNA分子，生成片段化的cDNA与双链DNA；将片段化的cDNA与双链DNA进行末端补平处理。通过上述方式，本发明能够制备长度可调的片段化DNA，便于提高cDNA与双链DNA文库的建库效率，同时能消除长片段DNA不能有效测通的缺陷，并为长片段DNA序列的拼接提供校正序列。本方法可用于基于DNA扩增反应的测序文库构建。 | ||
| 搜索关键词： | 双链DNA 片段化 构建 文库 可控 长片段DNA 碱基 可用 双链DNA分子 片段化DNA 测序文库 长度可调 单链cDNA 分子片段 合成双链 断裂DNA 反转录 碱基处 酶处理 补平 建库 拼接 制备 校正 应用 合成 | ||
【主权项】：
1.一种DNA长度可控片段化方法，其特征在于，包括步骤为：(1)通过向合成与RNA模板互补的cDNA单链的RT反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的cDNA单链；在合成双链DNA的PCR反应中加入dUTP，得到含有dU碱基的双链DNA；(2)在所述cDNA单链和/或所述双链DNA上的dU碱基处进行UDG酶处理后，再进行酶处理法断裂DNA，生成片段化的单链cDNA和/或片段化的双链DNA。
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