[发明专利]一种埃博拉病毒分型检测引物、探针和试剂盒

摘要

本发明公开了一种埃博拉病毒分型检测引物和探针，包括扎伊尔型埃博拉病毒的检测引物和探针、苏丹型埃博拉病毒的检测引物和探针、科特迪瓦型埃博拉病毒的检测引物和探针、本迪布焦型埃博拉病毒的检测引物和探针以及莱斯顿型埃博拉病毒的检测引物和探针。同时，本发明还提供了包含所述分型检测引物和探针的试剂盒。本发明提供的埃博拉病毒分型检测引物和探针具有特异性好和灵敏度高等优点，可在同一检测体系中快速对五种埃博拉病毒进行分型检测，各种亚型的埃博拉病毒检测引物和探针之间不会发生交叉反应，引物和引物之间、引物和探针之间、以及探针和探针之间不会形成二级结构，保证了检测效率和检测结果的准确性。 1

主权项

1.一种埃博拉病毒分型检测引物和探针，其特征在于，包含扎伊尔型埃博拉病毒的检测引物和探针、苏丹型埃博拉病毒的检测引物和探针、科特迪瓦型埃博拉病毒的检测引物和探针、本迪布焦型埃博拉病毒的检测引物和探针以及莱斯顿型埃博拉病毒的检测引物和探针；

所述扎伊尔型埃博拉病毒检测引物中上游引物序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物如SEQ ID NO:2所示，检测探针如SEQ ID NO:3所示；所述苏丹型埃博拉病毒检测引物中上游引物序列如SEQ ID NO:4所示，下游引物如SEQ ID NO:5所示，检测探针如SEQ ID NO:6所示；所述科特迪瓦型埃博拉病毒检测引物中上游引物序列如SEQ ID NO:7所示，下游引物如SEQ ID NO:8所示，检测探针如SEQ ID NO:9所示；所述本迪布焦型埃博拉病毒检测引物中上游引物序列如SEQ ID NO:10所示，下游引物如SEQ ID NO:11所示，检测探针如SEQ ID NO:12所示；所述莱斯顿型埃博拉病毒检测引物中上游引物序列如SEQ ID NO:13所示，下游引物如SEQ ID NO:14所示，检测探针如SEQ ID NO:15所示。

2.根据权利要求1所述的埃博拉病毒分型检测引物和探针，其特征在于，针对不同亚型埃博拉病毒的检测探针的5’端标记有不同的荧光基团；优选地，所述荧光基团选自FAM、VIC、610、Texas Red和CY5。

3.一种埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1或2所述的检测引物和探针。

4.根据权利要求3所述的埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，所述检测引物为检测引物混合液，每条引物的浓度为20uM；所述检测探针为检测探针混合液，每条探针的浓度为20uM。

5.根据权利要求4所述的埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还可以包含以下组分：PCR反应液、RT‑PCR酶、阳性对照品和阴性对照品。

6.根据权利要求5所述的埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包含以下组分：pH 8.4的200mM Tris‑HCl、500mM KCl、25mM MgCl₂和10mM dNTPs。

7.根据权利要求5所述的埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，所述RT‑PCR酶包括逆转录酶和Taq DNA聚合酶，且所述逆转录酶与Taq DNA聚合酶的体积比为3：1。

8.根据权利要求5所述的埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为包含五种埃博拉病毒目的扩增序列的质粒；所述阴性对照品为DEPC ddH₂O。

9.根据权利要4所述的埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，所述每条引物在单个PCR反应容器中的浓度为0.16uM；所述每条探针在单个PCR反应容器中的浓度为0.08uM。

10.根据权利要6所述的埃博拉病毒分型检测试剂盒，其特征在于，所述MgCl₂在单个PCR反应容器中的浓度为2mM。