[发明专利]VZV糖蛋白在毕赤酵母中的表达方法及其应用

摘要

本发明公开了一种VZV糖蛋白在毕赤酵母中的表达方法及其应用，包括：构建表达载体，筛选阳性转化子，线性化酵母表达载体，制备酵母电转化感受态、重组子的鉴定、重组酵母的表达和目标蛋白鉴定。本发明公开的表达方法能够成功表达水痘‑带状疱疹病毒的糖蛋白E，且所得蛋白免疫原性好，且该毕赤酵母可高效且稳定表达。

主权项

1.VZV糖蛋白在毕赤酵母中的表达方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：步骤a、构建表达载体：将经密码子优化后的VZV病毒糖蛋白E的基因全序列设计引物连有酶切位点，进行PCR扩增，扩增后片段经酶切后与毕赤酵母载体pPink‑HC或pGAPZαA连接；步骤b、筛选阳性转化子：将步骤a所得重组表达载体pHC‑gE或pGAPZαA‑gE转化至大肠杆菌再将菌液涂布LB平板培养至单菌落后培养并提取质粒；步骤c、线性化酵母表达载体：将步骤b所得质粒线性化单酶切、回收；步骤d、制备酵母电转化感受态：将步骤c线性化酵母表达载体电转化至酵母感受态细胞中，电击后经恒温摇床培养，再将菌液涂布于YPD平板上，将经恒温培养箱中避光培养至单菌落长出；步骤e、重组子的鉴定：经测序确定正确的重组子；步骤f、重组酵母的表达：将转化后长出的转化子经YPD液体培养基避光摇瓶培养得目标蛋白；步骤g、目标蛋白鉴定：取步骤f所得重组子表达蛋白进行SDS PAGE电泳和Westernblot的检测，所得蛋白检测结果与目标一致。