[发明专利]一种提取与快速筛选黄芪中天然α-葡萄糖苷酶抑制剂的方法

摘要

本发明使用超滤离心法结合UPLC‑MS/MS技术，从黄芩根的黄芩活性成分溶液中快速筛选出13种具有α‑葡萄糖苷酶结合活性的化合物，并获得其化学结构信息。这些成分之间的协同作用使得该天然产物样品具有很强的α‑葡萄糖苷酶抑制活性(其IC50值为阳性对照阿卡波糖的50％)。超滤离心法结合高分辨质谱技术与传统的生物分析引导柱分离技术相比，具有远高于传统手段的筛选效率。

主权项

1.一种提取与快速筛选黄芩中天然α‑葡萄糖苷酶抑制剂的方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：(1)称取100g黄芩，粉碎，过100目筛，使用有机溶剂热回流提取3次，提取时间2‑3h，70‑80℃，使用正丁醇溶液对70％乙醇提取物进行萃取，取有机相溶液减压浓缩后旋干，最后加甲醇复溶得到10μg/mL样品液，过0.22μm滤膜，即得到黄芩活性成分溶液，装瓶，4℃保存，备用。(2)在反应器中加入190μL乙酸铵缓冲液和2μL上述步骤制得的黄芩活性成分溶液，再加入8μLα‑葡萄糖苷酶，得混合液体积200μL，置于恒温反应器中孵育，之后将混合液加入超滤离心管(2mL,10,000MWCO)中超滤离心，收集滤渣，弃掉滤液；再用乙酸铵缓冲液洗涤，重复三次，然后加入200μL体积比为1:1的甲醇‑水混合溶液后超速离心，重复三次，收集滤液，将滤液过膜，通过液相色谱‑质谱联用技术检测，得到天然α‑葡萄糖苷酶抑制剂。