[发明专利]鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：将新鲜鲻鱼的鱼肉制备成鱼糜，将鱼糜冻干后粉碎，得冻干鱼粉；将冻干鱼粉利用乙酸乙酯进行脱脂，冷冻干燥后粉碎，得到脱脂鲻鱼蛋白粉(GM)；将脱脂鲻鱼蛋白粉(GM)进行酶解，然后离心，所得离心液冷冻干燥，得粗抗氧化肽(HGM)。将粗抗氧化肽(HGM)进行进一步的分离纯化，能获得鲻鱼蛋白源抗氧化肽。采用本发明的方法能获得抗氧化活性强的鲻鱼蛋白源抗氧化肽。 1

主权项

1.鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征是包括以下步骤：

1)、将新鲜鲻鱼的鱼肉制备成鱼糜，将鱼糜冻干后粉碎，得冻干鱼粉；

2)、脱脂：

将冻干鱼粉与乙酸乙酯按1g:2～5ml的料液比混合后于50～60℃搅拌100～120min从而进行脱脂；抽滤，所得滤饼冷冻干燥后粉碎，得到脱脂鲻鱼蛋白粉(GM)；

3)、酶解：

将脱脂鲻鱼蛋白粉(GM)与水按1:15～25的质量比混合作为反应体系，调节反应体系的pH值为6～8、温度为45～55℃，按4.5～6.5U酶/mg脱脂鲻鱼蛋白粉(GM)的加酶量加入蛋白酶后保温酶解3～5小时；

酶解时间到达后灭酶，然后离心，所得离心液冷冻干燥，得粗抗氧化肽(HGM)。

2.根据权利要求1所述的鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征是：将粗抗氧化肽(HGM)进行分离纯化，包括以下步骤：

①、通过凝胶色谱层析法对粗抗氧化肽(HGM)进行初步分离：

将HGM通过葡萄糖凝胶Sephadex G‑25层析进行分离，测定各组分的抗氧化活性，收集活性最高的组分HGM‑F4；

②、将HGM‑F4用反相高效液相色谱进一步分离，得到鲻鱼抗氧化肽HGM‑F4‑B4。

3.根据权利要求2所述的鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征是，所述步骤①为：

选用凝胶柱规格为2.6cm×60cm，凝胶介质为Sephadex G‑25，上样量为50～100mg，以超纯水为洗脱缓冲液，控制流速0.6mL/min，每五分钟收集一管，洗脱时间295～385min的为组分HGM‑F4。

4.根据权利要求2所述的鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征是，所述步骤②为：

组分HGM‑F4用半制备型RP‑HPLC进行分离，采用半制备柱YMC‑PACK ODS‑AQ C18柱，上样量为5mL，洗脱条件如下：

其中流动相A为含0.5％三氟乙酸的超纯水，流动相B含0.5％三氟乙酸的乙腈。

5.根据权利要求1～4任一所述的鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征是：所述蛋白酶为木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶、复合蛋白酶、胰蛋白酶。

6.根据权利要求1～4任一所述的鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征是：

所述步骤3)中，于95～100℃的水浴锅中灭酶10～15分钟；所述离心为8000～12000r/min、3～5℃、离心8～12min。

7.根据权利要求1～4任一所述的鲻鱼蛋白源抗氧化肽的制备方法，其特征是：

所述步骤1)中，新鲜鲻鱼，去除鱼头、鱼尾及内脏，鱼肉经高速组织匀浆机斩拌，得鱼糜；于‑80℃冻干至恒重，粉碎至过80目筛，得冻干鱼粉。