[发明专利]一种育种改进的玉米SSR标记快速银染检测方法

摘要

本发明公开了一种育种改进的玉米SSR标记快速银染检测方法。涉及玉米育种技术领域。包括玉米种子；玉米种子为28个不同育种单位提供。本发明通过快速银染法将固定和染色两步合二为一，染色后不经洗脱直接显影，显影较快，一般不超过2min即可获得清晰的带型，整个过程不超过10min，且染色背景随着时间的延长有一定程度的加深，长时间的显影不会影响读取的结果。 1

主权项

1.一种育种改进的玉米SSR标记材料，其特征在于，包括玉米种子：所述玉米种子为28个不同育种单位提供。

2.如权利要求1所述的一种育种改进的玉米SSR标记快速银染检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，取所述玉米种子加液氮研磨成粉末状，转入1.5ml的离心管中，‑20℃冰箱保存；

步骤二，加入600ul65℃的十六烷基三甲基溴化铵混匀并置于65℃的水浴中保温30‑60min；

步骤三，取出，冷却，上下摇匀，后加入600ul24：1的氯仿异戊醇；

步骤四，12000转/min离心10min，取上清液与另一个1.5ml的离心管中；

步骤五，加异丙醇，12000转/min离心10min，倒掉上清液；

步骤六，干后用100％的酒精清洗；

步骤七，PCR扩增包括如下步骤：

①取20ul反应液混匀并置于94℃的水浴中保温5min预变性，1个循环；

②依次放置于：94℃的水浴中保温变性40s、60℃的水浴中保温退火35s、72℃的水浴中保温延伸45s，共35个循环；

步骤八，扩增产物电泳分离包括如下步骤：

①准备电极液；

②将梳子拨出，并迅速用电极液冲洗胶面；

③不预电泳；

④点样，电泳220V；

步骤九，向电泳液中加入染色剂染色5min，再滴入显影液显影。

3.根据权利要求2所述的一种育种改进的玉米SSR标记快速银染检测方法，其特征在于，步骤七中所述反应液包括10mmol/L Tris‑HCl、50mmol/L KCl、2.5mmol/L MgCl₂、0.25umol/L SSR引物。

4.根据权利要求2所述的一种育种改进的玉米SSR标记快速银染检测方法，其特征在于，步骤九所述染色剂包括10％乙醇、0.5％乙酸和0.2％AgNO₃；所述液显影包括3％NaOH、0.5％甲醛。