[发明专利]一种LRP4抗体细胞包被微孔板制备方法

摘要

本发明提供了一种LRP4抗体细胞包被微孔板及制备方法和人LRP4抗体细胞免疫荧光检测试剂盒，属于疫检测技术领域，所述人LRP4抗体细胞免疫荧光检测试剂盒包括LRP4细胞包被微孔板，样品稀释液，阳性对照品、二抗和封闭液。本发明提供的LRP4抗体细胞包被微孔板上直接包被有LRP4‑GFP‑HEK293T重组细胞和EGFP‑HEK293T重组细胞；避免了短时期内重复进行质粒转染、细胞接种、细胞培养等过程次数，进而降低每次检测的成本，缩短检测时间。

主权项

1.一种LRP4抗体细胞包被微孔板的制备方法，包括以下步骤：1)提供LRP4‑GFP‑HEK293T重组细胞和EGFP‑HEK293T重组细胞：A)将携带GFP基因的重组LRP4全长DNA片段和表达EGFP基因的DNA片段分别重组到慢病毒载体pFUGW‑H1中，获得pFUGW‑LRP4‑GFP重组病毒和pFUGW‑EGFP重组病毒；所述重组LRP4全长DNA片段的具体序列如Seq ID No.1所示；B)将获得pFUGW‑LRP4‑GFP重组病毒和pFUGW‑EGFP重组病毒分别转染到HEK293细胞，分别获得LRP4‑GFP‑HEK293T重组细胞和EGFP‑HEK293T重组细胞；采用流式细胞学筛选方法分别纯化LRP4‑GFP‑HEK293T重组细胞和EGFP‑HEK293T重组细胞；2)分别将所述LRP4‑GFP‑HEK293T重组细胞和EGFP‑HEK293T重组细胞以行为单位，交替放于每行微孔中用固定液固定、加入细胞冻存液后置于‑80～‑200℃保存；所述重组细胞的接种密度为0.8～1.2×10⁵/孔；所述固定液为质量浓度3～5％的多聚甲醛；所述固定的时间为8～12min；所述细胞冻存液为DMSO液；所述DMSO液中胎牛血清FBS：DMSO为9:1。