[发明专利]一种松香酸人工抗原的合成方法在审
| 申请号： | 201810047550.7 | 申请日： | 2018-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN108084259A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 耿志明;卞欢;诸永志 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765;C07K14/795;C07K1/107 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种松香酸人工抗原的合成方法，其包括以下步骤：以12‑羟基松香酸(12‑HA)为半抗原，通过两步1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺(DEC)催化反应，以己二酸(AA)为偶联臂，分别与血蓝蛋白(KLH)和牛血清蛋白(BSA)偶联，合成松香酸人工抗原12‑HA‑AA‑KLH和12‑HA‑AA‑BSA。运用本发明所述合成方法制得的松香酸人工抗原免疫家兔获得的多克隆抗体具有理想的效价，可以用于畜禽肉制品中松香残留的ELISA方法的建立。 | ||
| 搜索关键词： | 人工抗原 松香酸 合成 二甲氨基丙基 多克隆抗体 牛血清蛋白 畜禽肉制品 松香 催化反应 免疫家兔 碳二亚胺 血蓝蛋白 羟基松香 半抗原 己二酸 偶联臂 偶联 效价 乙基 残留 | ||
【主权项】：
1.一种松香酸人工抗原的合成方法，其特征在于以12-羟基松香酸(12-HA)为半抗原，通过两步1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(DEC)催化反应，以己二酸(AA)为偶联臂，分别与血蓝蛋白(KLH)和牛血清蛋白(BSA)偶联，制得松香酸人工抗原12-HA-AA-KLH和12-HA-AA-BSA。步骤为：1、载体蛋白的己二酸一酰化按KLH∶AA∶DEC＝1∶10∶3的质量比称取相应的药品，KLH预先用无水二甲基甲酰胺(DMF)溶解，室温搅拌下缓慢加入AA和DEC，在室温下搅拌过夜。反应液转移至透析袋，在蒸馏水中透析48h，期间更换蒸馏水(4×2L)。透析过的溶液冻干，得到己二酸一酰化钥孔血蓝蛋白(AA-KLH)。按上述方法制备己二酸一酰化牛血清蛋白(AA-BSA)，其中BSA∶AA∶DEC＝1∶4∶2(质量比)。2、偶联按12-HA∶AA-KLH∶DEC＝1∶2.5∶3的质量比称取相应的药品，将AA-KLH用无水DMF溶解，然后加入12-HA和DEC，在室温下搅拌过夜。反应液转移至透析袋，在蒸馏水中透析48h，期间更换蒸馏水(4×2L)。透析过的溶液冻干，得到12-HA-AA-KLH。按上述方法制备12-HA-AA-BSA，其中12-HA∶AA-BSA∶DEC＝1∶3∶3(质量比)。3、人工抗原的光谱分析及其偶联比测定采用荧光光谱仪分析载体蛋白(KLH、BSA)和人工抗原(12-HA-AA-KLH和12-HA-AA-BSA)的荧光光谱，采用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)比色法测定12-HA-AA-KLH和12-HA-AA-BSA的偶联比。
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