[发明专利]针对肝癌相关抗原DLK1为靶点的CAR-T构建方法

摘要

本发明公开了针对肝癌相关抗原DLK1为靶点的CAR‑T构建方法。本发明选择肝癌相关抗原DLK1的单链抗体重组于T细胞中，经基因工程改造后的T细胞被进一步激活，进而增强T细胞对肝癌细胞的杀伤力；所述DLK1的单链抗体是通过分泌DLK1单克隆抗体的杂交瘤细胞株中获得RNA，并经反转录后得到cDNA；设计重链可变区和轻链可变区的PCR引物；以所述cDNA为模板，进行重链和轻链可变区的扩增和拼接获得的。本发明的检测方法具有相对敏感性和特异性，并能降低T细胞对正常细胞识别带来的副作用。本发明对CAR‑T细胞免疫疗法在肝癌免疫治疗方面提供一定的研究基础。

主权项

1.一种分泌DLK1单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株是通过包含如下步骤的方法制备而得：S1、选取重组人DLK1蛋白胞外端为免疫原；S2、动物免疫：通过小鼠皮下免疫，获得分泌高效价的抗人DLK1单克隆抗体的小鼠；S3、挑取分泌高效价的抗人DLK1单克隆抗体的SP2/0和Balb/c小鼠脾脏细胞，在体外与小鼠骨髓瘤细胞融合；S4、酶联免疫吸附试验筛选抗体分泌阳性的杂交瘤细胞；S5、阳性杂交瘤细胞经亚克隆鉴定得到稳定分泌抗人DLK1单克隆抗体的杂交瘤单克隆细胞，即所述杂交瘤细胞株。