[发明专利]一种小鼠IL-38的生产方法

摘要

本发明涉及一种小鼠IL‑38的生产方法。采用基因工程方法生产，该方法包括以下步骤：1)小鼠IL‑38基因密码子优化与合成；2)PCR引物合成；3)PCR扩增获得小鼠IL‑38片段；4)构建pET28a‑mIL‑38重组载体；5)将pET‑28a‑mIL‑38转化大肠杆菌BL21，构建小鼠IL‑38基因工程菌；6)培养小鼠IL‑38基因工程菌，诱导小鼠IL‑38蛋白表达，该工程菌表达的重组IL‑38主要为可溶蛋白；7)用Ni‑NAT对表达的小鼠IL‑38蛋白进行纯化即可得到较高纯度的小鼠IL‑38蛋白。小鼠IL‑38蛋白的成功制备，为探究IL‑38在各种小鼠炎症疾病模型中的作用及其分子机制奠定了基础。

主权项

1.一种小鼠IL‑38的生产方法，其特征在于，采用基因工程技术生产，所述的基因工程技术包括以下步骤：1)构建pUC57‑mIL‑38质粒：合成小鼠IL‑38基因，克隆入pUC57载体质粒，构建pUC57‑mIL‑38质粒；2)PCR扩增：以P1和P2为特异性引物，在引物的两侧导入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点，以pUC57‑mIL‑38质粒为模板，进行PCR扩增；所述的特异性引物P1和P2的序列为：P1：5’‑GGGGAATTCATGTGCTCTCTGCCGATG‑3’P2：5’‑CCCAAGCTTACGGCTCATTTCAAAATAAAAT‑3’3)pET28a‑mIL‑38重组表达载体的构建：将PCR扩增产物和pET28a载体质粒分别用EcoRⅠ、HindⅢ进行双酶切，双酶切后凝胶回收mIL‑38与pET28a载体，回收后的mIL‑38与pET28a载体经T4连接酶定向连接，构建原核表达质粒pET28a‑mIL‑38；4)转化：将原核表达质粒pET28a‑mIL‑38转化大肠杆菌BL21，获得IL‑38重组工程菌；5)小鼠IL‑38蛋白的诱导表达：将IL‑38重组工程菌接种于含卡那霉素的LB培养基中，37℃、200r/min震荡培养过夜；次日，以1:50比例扩大培养，37℃、210r/min震荡培养1.5～2h，至OD600达到0.6时，加入终浓度为0.7mmol/L的IPTG进行诱导表达，获得菌体；6)小鼠IL‑38蛋白的纯化：采用超声破碎法将获得的菌体裂解，离心取上清液，用Ni‑NAT对上清液进行纯化，得纯化的IL‑38蛋白。