[发明专利]用于纯化生物大分子复合物的方法

摘要

本发明在第一方面涉及用于纯化生物大分子复合物的方法。通常来说，未应用色谱步骤。即，本发明涉及用于纯化生物大分子复合物的方法。此外，本发明涉及用于使生物大分子复合物结晶的方法，其包括所述纯化的步骤，然后在包含水溶性聚合物的储库溶液中结晶。此外，提供了可通过根据本发明方法获得的经纯化生物大分子复合物以及结晶的生物大分子复合物。最后，提供了用于确定候选化合物用于抑制个体之20S蛋白酶体的适合性的方法。所述方法特别地可用于在个体中鉴定20S蛋白酶体之合适抑制剂的用于治疗、改善或预防癌症、自身免疫病、肌营养不良、肺气肿或伴随癌症或AIDS之恶病质的个体化医疗。

主权项

1.用于纯化生物大分子复合物的方法，其包括以下步骤：a)提供包含所述生物大分子复合物的粗制样品；b)以25,000至35,000×g进行用于分离细胞碎片的第一离心步骤；c)向从所述第一离心步骤获得的上清液补充0％至25％(w/v)之量的渗压剂和允许半胱氨酸发生巯基烷基化的化合物；d)通过以50,000至150,000×g、例如80,000至120,000×g离心进行第二离心步骤；e)用水溶性聚合物，特别是非离子聚合物或具有零净电荷的聚合物，例如聚亚烷基二醇、多胺或聚羧酸盐/酯处理从所述第二离心步骤获得的上清液，用于沉淀；f)在沉淀物重悬于不含所述聚合物例如聚亚烷基二醇的缓冲液中之后，使用渗压剂与基于所述聚合物的沉淀物例如基于聚亚烷基二醇的沉淀物进行密度梯度离心；g)任选地重复步骤e)和f)一次或多次；h)通过对所述生物大分子复合物进行基于水溶性聚合物的沉淀例如基于聚亚烷基二醇的沉淀来进行浓缩；用于获得经纯化的生物大分子复合物。