[发明专利]一种串珠石斛组织培养扩繁的方法

摘要

本发明公开了一种串珠石斛组织培养扩繁的方法，包括外植体选择步骤、外植体消毒步骤、播种步骤、继代培养步骤、生根培养步骤和炼苗、驯化移栽步骤。本发明的制备方法从母本源头控制种质的稳定性，能够有效的提高串珠石斛种苗的繁育的速度及繁育数量，保证种苗质量，实现串珠石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。 1

主权项

1.一种串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于包括：

外植体选择步骤：选择串珠石斛母本植株，对其人工授粉，让其长出果荚，继续培育，待果荚成熟后，将其采摘保存；

外植体消毒步骤：取出果荚放入培养瓶中，先洁净果荚，然后对果荚外壳进行一次消毒1‑2min，然后用无菌水冲洗3‑4次，再进行二次消毒6‑8min，然后用无菌水冲洗4‑5次，备用；

播种步骤：将消毒后的果荚解剖开露出黄色果粉，将果粉撒到第一1/2MS培养基上，封上培养瓶的瓶盖，培养至种子萌发；

继代培养步骤：萌发的串珠石斛种子继续培养，串珠石斛种苗长到2‑3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2MS培养基中，长至5‑6cm时称为二级母瓶；

生根培养步骤：将二级母瓶转至MS培养基中，生根培养得到生根瓶苗；

炼苗、驯化移栽步骤：将生根瓶苗培养85‑95天，再将其移到避免强光直射的室外环境中，放置15‑30天，再打开培养瓶的瓶盖放置3‑5天后，用多菌灵稀释液浸泡串珠石斛苗根部，洗净阴干水分，将其移栽到基质中驯化。

2.如权利要求1所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：外植体选择步骤具体为，选择串珠石斛2‑4年的母本植株，对其人工授粉，让其长出果荚，继续培育3‑4个月，待果荚成熟后，将其采摘放置在3‑7℃的环境下保存1‑3周。

3.如权利要求1所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：外植体消毒步骤中，洁净果荚的具体步骤为，先将果荚用洗洁精水浸泡15‑20min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗10‑15min，然后将果荚用浓度75％医用酒精浸泡30‑60s，无菌水冲洗3‑4次，再进行消毒；用浓度为1‑3％的次氯酸钠进行一次消毒，用浓度为0.1‑0.3％的氯化汞进行二次消毒。

4.如权利要求1所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：播种步骤中，第一1/2MS培养基中添加浓度为1‑4％的蔗糖，4.5‑5.0g/L的琼脂粉，pH调至5.8‑6.2。

5.如权利要求1所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：播种步骤中，培养25‑30天至种子萌发，培养的条件为，温度为24℃‑26℃，光照强度为2000‑2500lx，光照时间为10‑12小时/天。

6.如权利要求1所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：继代培养具体为，萌发的串珠石斛种子置于光照强度为2000‑2500lx的培养室中继续培养40‑50天，光照时间为10‑12小时/天，串珠石斛种苗长到2‑3cm高时称之为一级母瓶，此时将一级母瓶在无菌操作台上转到第二1/2MS培养基中，培养55‑65天，长至5‑6cm时称为二级母瓶。

7.如权利要求6所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：继代培养步骤中，第二1/2MS培养基中添加0.3‑0.9mg/L的萘乙酸，1.5‑2.0mg/L的6‑苄基腺嘌呤，浓度为1‑5％的蔗糖，4.5‑5.1g/L的琼脂粉，32‑38g/L的土豆汁，0.1‑0.5g/L的活性碳粉，pH调至5.8‑6.0。

8.如权利要求1所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：生根培养具体为，将生长45‑55天的二级母瓶在无菌操作台上转至MS培养基中，生根培养85‑95天，得到生根瓶苗。

9.如权利要求8所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：生根培养步骤中，MS培养基中添加1.0‑3.0mg/L的萘乙酸，1.0‑1.5mg/L的6‑苄基腺嘌呤，浓度为1‑5％的蔗糖，4.5‑5.2g/L的琼脂粉，32‑38g/L的土豆汁，22‑28g/L的香蕉汁，0.1‑0.5g/L的活性碳粉，pH调至5.8‑6.0。

10.如权利要求1所述的串珠石斛组织培养扩繁的方法，其特征在于：炼苗、驯化移栽步骤中，将生根瓶苗培养85‑95天的具体步骤为，瓶苗在培养室长至55‑65天后，将其移至温度为22‑28℃、湿度为45％‑75％的大棚中炼苗20‑40天。