[发明专利]利用PCR-荧光探针法检测MicroRNA 155核酸定量的试剂盒

摘要

本发明为一种利用PCR‑荧光探针法检测MicroRNA 155核酸定量的试剂盒。通过RT‑PCR的方法，将样品中的RNA逆转录得到相应的cDNA，再利用特定的引物和探针，结合实时荧光定量PCR检测技术，可以准确检测样本中microRNA 155的表达量。此种检测方法可以对食管癌患者的外周血血清样本中的microRNA 155进行定量分析，临床上可以用以辅助诊断和评价预后的治疗效果。本发明通过分子学上的医学检测手段来指导临床治疗，具有一定的临床价值。

主权项

1.本发明为一种利用PCR‑荧光探针法检测MicroRNA 155核酸定量的试剂盒，含有4种组分，分别为：一步法RT‑PCR反应液(360μL/管)，阳性对照品(50μL/管)、阴性对照品(50μL/管)、2×10⁶copies/μl标准品(20μL/管)主要成份组成； (1)一步法RT‑PCR反应液中含有DEPC处理的水、逆转录酶、Taq酶、dNTPs、RT‑PCR缓冲液、寡聚(dT)_15‑18、MgCL₂(3mM)、检测用上游引物(0.2μM)、检测用下游引物(0.2μM)、荧光探针(0.3μM)； (2)本发明的试剂含有特异的引物、探针序列，以及标准品序列： 检测用上游引物序列为：5’—CTGTTAATGCTAATCGTG—3’检测用下游引物序列为：5’—CTGTTAATGCTAATATGTAG—3’荧光探针序列：5’—FAM—AGTCAGTTGGAGGCAAAAAC—TAMRA—3’ (3)质控品分为阳性对照品和阴性对照品，阳性对照品为有microRNA 155的RNA样品，阴性对照品为无microRNA 155的RNA样品； (4)2×10⁶copies/μl标准品为含有标准扩增序列的质粒，标准品序列为：CTGTTAATGCTAATCGTGATAGGGGTTTTTGCCTCCAACTGACTCCTACATATTAGCATTAACAG。