[发明专利]一种基于4H-三唑环结构限定性N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉抗原、抗体及应用

摘要

本发明公开了一种基于4H‑三唑环结构限定性N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原、人工抗原、抗体及应用。一种N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原，结构如式I所示：其中R为羧基和对羧基苯基。并以此制备了N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原和抗体，对N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉的检测效率高、操作简便，可用于N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉的酶联免疫快速检测；且本发明的抗原抗体合成过程简单、成本较低，具有良好的应用前景。

主权项

1.一种N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原，其特征在于，结构如式I所示：

其中R为羧基和对羧基苯基。

2.一种权利要求1所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在室温下，先使N‑氰基二硫代亚胺碳酸二甲酯和吗啉发生反应制备中间体b，然后与80%水合肼反应制备中间体c，再加入乙醛酸或对醛基苯甲酸与中间体c发生曼尼希反应，制备N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原Ia、Ib，其反应式为：

。

3.权利要求1所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原在制备N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原方面的应用。

4.一种N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原，其特征在于，是由权利要求1所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原与载体蛋白偶联得到。

5.根据权利要求4所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原，其特征在于，所述载体蛋白为牛血清蛋白或卵清蛋白。

6.根据权利要求4所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原，其特征在于，采用活泼酯法制备，，具体步骤包括：将N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原、DCC和NHS溶于适量的DMF中，4℃搅拌反应过夜，离心取上清即得活化好的N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉衍生物，将活化好的半抗原衍生物逐滴加入到含有5mg/mL载体蛋白的PBS缓冲溶液中，4℃搅拌反应12h，4℃用PBS透析3天，每天更换透析液3次，得到N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原，分装，并低温保存备用；所述的N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原与载体蛋白的的摩尔比为40‑100:1。

7.权利要求4所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原在制备抗N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉多克隆抗体、单克隆抗体或基因工程抗体方面的应用。

8.一种N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉抗体，其特征在于，以权利要求4所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原制备得到。

9.权利要求8所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉抗体在免疫法检测N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉中的应用。

10.一种直接检测N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉的快速免疫分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将权利要求4所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原作为免疫原免疫动物制备抗N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉多克隆抗体；

（2）将权利要求4所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原作为包被原包被在微孔板上，将上步制备得到的抗N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉多克隆抗体加入微孔板中；

（3）采用间接竞争ELISA方法检测抗血清效价。