[发明专利]一种用于两种霉菌毒素同时检测的适配体传感器制备方法

摘要

本发明提供了一种用于两种霉菌毒素同时检测的适配体传感器制备方法，涉及材料学、光分析化学、纳米生物传感等技术领域。本发明是基于核酸适配体和目标物(OTA和AFB1)的特异性识别作用并借助荧光光度计来实现信号输出，该方法有特异性高、稳定性强、对周围环境要求不高等特点。本发明运用的磁性纳米微球和二氧化硅纳米球具有较大的比表面积和良好的生物相容性，能够负载更多的信号分子，可以有效提高检测的灵敏度；以同一激发波长下不同发射波长的gQDs和rQDs作为荧光信标构建了磁控荧光适配体传感器，实现了对OTA和AFB1的同时检测。

主权项

1.一种用于两种霉菌毒素同时检测的适配体传感器制备方法，其特征在于按照下述步骤进行：步骤1、发射绿色荧光的水溶性碲化镉量子点(记为gQDs)和发射红色荧光的水溶性碲化镉量子点(记为rQDs)的制备；步骤2、单分散SiO2纳米球的制备；步骤3、金包四氧化三铁壳‑核磁性纳米球(记为MBs)的制备；步骤4、gQDs包覆的SiO2(记为SiO2@gQDs)和rQDs包覆的SiO2(记为SiO2@rQDs)杂化纳米球的制备：取步骤2制备的SiO2纳米球和含0.02M NaCl的聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)溶液于烧杯中混合均匀，磁力搅拌反应3h；产物经离心分离、洗涤后，制得PDDA修饰的SiO2(简称为PDDA‑SiO2)；然后，加入步骤1中制备的gQDs或rQDs水溶液，于避光条件下磁力搅拌反应3h，经离心分离、洗涤后，将产物分散到蒸馏水中，备用；步骤5、SiO2@gQDs标记的cDNA1(记为cDNA1‑SiO2@gQDs)和SiO2@rQDs标记的cDNA2(简称为cDNA2‑SiO2@rQDs)信号探针的制备：取步骤4制备的SiO2@gQDs和SiO2@rQDs分别分散于离心管中，加入1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N‑羟基丁二酰亚胺(NHS)活化交联溶液，振荡反应1h，随后分别加入cDNA1和cDNA2储备液，振荡孵育过夜，通过酰胺键将cDNA1和cDNA2分别藕联到SiO2@gQDs和SiO2@rQDs表面制备cDNA1‑SiO2@gQDs和cDNA2‑SiO2@rQDs信号探针，离心洗涤后，将其重新分散在Tris‑HCl(pH 7.4，10mM)溶液中，备用；步骤6、MBs标记的Apt1(记为MBs‑Apt1)和MBs标记的Apt2(记为MBs‑Apt2)磁性捕获探针的制备：取步骤3制备的MBs的分散液于离心管中，加入aptamer，振荡孵育过夜，通过Au‑S键将Apt1和Apt2分别藕联到MBs表面制备MBs‑Apt1和MBs‑Apt2磁性捕获探针，离心洗涤后，将其重新分散在Tris‑HCl(pH 7.4，10mM)溶液中，备用；步骤7、传感器的构建及样品的检测，包括：纳米生物复合物的制备：取步骤5制备的cDNA1‑SiO2@gQDs信号探针和步骤6制备的MBs‑Apt1磁性捕获探针于离心管中混合，同样，取步骤5制备的cDNA2‑SiO2@rQDs信号探针和步骤6制备的MBs‑Apt2磁性捕获探针于另外一支离心管中，混合37℃振荡孵育2h，基于Aptamer和cDNA之间的杂交反应分别制得纳米生物复合物1(记为MBs‑Apt1/cDNA1‑SiO2@gQDs)和纳米生物复合物2(记为MBs‑Apt2/cDNA2‑SiO2@rQDs)，磁控分离、洗涤后，将其重新分散在Tris‑HCl缓冲溶液(pH 7.4，10mM，含120mM NaCl，20mM CaCl2，20mM MgCl2和5mM KCl)中，备用；对OTA和AFB1标准品进行同时检测，建立标准曲线：取所制备的MBs‑Apt1/cDNA1‑SiO2@gQDs和MBs‑Apt2/cDNA2‑SiO2@rQDs纳米生物复合物各400μL进行等量混合，然后，加入100μL包含不同浓度OTA和AFB1的混合溶液于离心管中，37℃振荡孵育40min；由于OTA与Apt1之间以及AFB1与Apt2之间的特异性结合，使得部分cDNA1‑SiO2@gQDs和cDNA2‑SiO2@rQDs信号探针分别从MBs‑Apt1/cDNA1‑SiO2@gQDs和MBs‑Apt2/cDNA2‑SiO2@rQDs纳米生物复合物上脱附；经磁分离后，收集已脱附的cDNA1‑SiO2@gQDs和cDNA2‑SiO2@rQDs，设置激发波长为365nm，扫描得到荧光谱图；通过荧光强度与OTA和AFB1标准品浓度之间的对应关系建立标准曲线。