[发明专利]一种土壤消毒剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种土壤消毒剂的制备方法，属于消毒剂领域。本发明从苍蝇体中提取一种抗菌物质，这种抗菌物质特异的方式抑制真菌内部几丁质等生物大分子的合成，从而影响到菌体细胞膜表面的能量分布，再加上苍术、石菖蒲、艾叶，由于苍术、石菖蒲、艾叶都具备一定的杀菌作用，利用海藻酸钠进行包裹释放，从而能够延长消毒剂抗菌的期限，且海藻酸钠具有成膜性，其吸附在微生物细胞表面，形成一层高分子膜，阻止了营养物质向细胞内运输，从而起到杀菌和抑菌作用。本发明解决了目前土壤消毒剂主要使用化学药剂对土壤进行喷淋或熏蒸等，虽然能杀死土壤中的细菌等生物，但药物残留，对植株不安全、难降解造成环境污染的问题。 1

主权项

1.一种土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，该制备方法包括如下步骤：

（1）将苍蝇放入温度为0~4℃的水中进行研磨，加入水质量0.01~0.02%的苄磺酰氟，研磨25~30min，得研磨液，将研磨液、磷酸缓冲液进行混合，在温度0~4℃下静置25~30min，并进行离心25~30min，得上清液，将上清液进行加热，温度至90~98℃，时间3~4min，再进行离心25~30min，取上清液，将上清液移入羧甲基纤维素层析柱进行阳离子交换层析，再用磷酸缓冲液、氯化钠溶液进行洗脱，收集洗脱液；

（2）按重量份数计，取3~4份君子兰叶、3~4份虎皮兰叶、1~2份石菖蒲进行混合，晾干，再放入粉碎机中粉碎，过筛，得过筛物，将海藻酸钠、水进行混合，并进行搅拌，再加入海藻酸钠质量10~15%的过筛物，进行搅拌，得搅拌混合物，将搅拌混合物在温度50~60℃下烘干，粉碎，过筛，得过筛物a，将洗脱液、过筛物a进行混合，并进行搅拌20~30min，得混合液，备用；

（3）将花圃中土样、无菌水进行混合，在温度30~40℃下振荡培养25~30 min，静置1~2h，取上清液，向上清液中加入50~60%的水稀释，在温度70~80℃水浴10~15min，得稀释液，将稀释液用接种环接种至固体培养基中，在温度20~30℃恒温箱中培养1~2d，挑取固体培养基的菌落，并接种至牛肉膏蛋白胨平板上划线分离纯化，挑选菌径最大的菌落，将菌径最大的菌落、液体培养基进行混合，在温度25~30℃，120~160r/min摇床培养15~18h，得培养液；

将活性污泥、糖蜜、水进行混合，高温灭菌，加入培养液，在温度25~30℃，160~180r/min条件下发酵1~2d，再加入草炭，混合均匀后，在温度40~50℃下干燥，并进行粉碎，得粉碎物，将步骤（2）备用的混合液、粉碎物进行混合，并进行搅拌10~15min，即得土壤消毒剂。

2.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中苍蝇、温度为0~4℃的水的质量比1：5~6，研磨液、磷酸缓冲液的质量比1：4~5。

3.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中磷酸缓冲液是按质量比1：2：5~6，将磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、水进行混合，即得磷酸缓冲液。

4.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中壳聚糖、温度为80~90℃的水的质量比1：3~4，洗脱液、过筛物a的质量比10~15：1~2。

5.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中花圃中土样、无菌水的质量比1：10~15，菌径最大的菌落、液体培养基的质量比1：5~6。

6.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中固体培养基是按重量份数计，取40~50份水、10~15份琼脂、10~15份甘露醇、5~7份碳酸钙、0.2~0.4份磷酸二氢钾、0.2~0.4份硫酸镁、0.2~0.4份氯化钠、0.1~0.2份硫酸钙进行混合，高温灭菌，即得固体培养基。

7.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中牛肉膏蛋白胨平板是按重量份数计，取50~60份水、15~25份琼脂、10~15份蛋白胨、5~7份氯化钠、3~4份牛肉膏进行混合，高温灭菌，即得牛肉膏蛋白胨平板。

8.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中液体培养基是按重量份数计，取40~50份水、10~15份甘露醇、5~7份碳酸钙、0.2~0.4份磷酸二氢钾、0.2~0.4份硫酸镁、0.2~0.4份氯化钠、0.1~0.2份硫酸钙进行混合，高温灭菌，即得液体培养基。

9.根据权利要求1所述土壤消毒剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（4）中按重量份数计，取40~50份水、40~50份活性污泥、10~15份糖蜜、5~6份培养液、3~4份草炭，步骤（2）备用的混合液、粉碎物的质量比30~40：5~6。