[发明专利]一种冬虫夏草的种植方法

摘要

本发明公开一种冬虫夏草的种植方法，属于农业种植领域，由以下步骤组成1、培养基配方2、配制方法3、菌种分离；4、蝙蝠蛾幼虫的饲养与接菌；较佳地，该光照培养的光照强度为300～500lux。较佳地，该培养环境包含有培养湿度为70～90％、培养温度为15～25℃，其中，在本发明的一具体实施例中，该培养温度为20℃。较佳地，暗室培养的时间为至少4周，其中，在本发明的一具体实施例中，暗室培养时间为6周时，能获得较高量的虫草素。较佳地，该培养基的含水量为50～60％。

主权项

一种冬虫夏草的种植方法，其特征在于：培养基配方包括玉米250克、蛋白胨25克、酵母粉2.5克、磷酸二氢钾2.5克、维生素B15片、链霉素2.5克、硫酸镁1克、葡萄糖40克、水2500毫升；配制方法：将玉米用清水洗净放入锅内加水2500毫升煮沸30分钟，冷却后用四层纱布过滤去渣，取其汁液于锅中，加蛋白胨25克、酵母粉2.5克、磷酸二氢钾2.5克、维生素B15片、链霉素2.5克、硫酸镁1克、葡萄糖40克，然后加热至全部溶化，冷却后分装在500毫升盐水瓶内，每瓶装液量250毫升，用棉塞塞紧封口后在高压锅内灭菌，温度达到121℃时保压2小时出锅，冷却后连同冬虫夏草二级母种斜面一同放入无菌箱中，准备转接；菌种分离，采新鲜虫草菌核，在无菌条件下，进行表面消毒后用无菌水冲洗，后用解剖刀分成小块，接种子斜面培养基上，培养基成分为蛋白胨10g，葡萄糖40g，磷酸二氢钾1g，硫酸镁0.5g，鸡蛋黄1g，维生素B1溶液20ml，琼脂20g，水1000ml，pH自然。置于26℃温度条件下，约15d可发出形似青霉的虫草菌。蝙蝠蛾幼虫的饲养与接菌，斜面菌种培养基用玉米粉、蔗糖、琼脂各20g，加入水1000ml，pH自然，在25℃下约7d即可转接一级摇瓶；液体菌种的培养，转接过程中严格遵守无菌操作规程，转接过程是将斜面试管中已长成的冬虫夏草母种转接到液体培养基中，接种时，要去掉母种块上的琼脂，使母种块漂浮在盐水瓶中的液体培养液上面，接种后放到恒温箱里在25℃，恒温培养3天，待液体菌种培养液面上的母种块长到直径为2.5cm的菌块时，就将盐水瓶转移到摇瓶机上在20‑28℃振荡培养10天，得冬虫夏草液体菌种；摇瓶和发酵罐培养基配方为玉米粉2％(煮沸30min，用纱布过滤取汁)，蔗糖2％，蛋白胨1％，酵母粉0.5％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％；摇瓶培养用500ml三角瓶装培养基100～150ml，接入斜面菌种，在摇床培养，150r/min，于25℃下振荡4d即可长好，可继续用1000ml或5000ml三角瓶扩大培养至需用液量，即可转入发酵罐培养；用500L发酵罐，投料300L，接种量10％，温度24～26℃，罐压29.4～49.1kPa(0.3～0.5kg/c㎡)，搅拌速度180r/min，用菜子油消泡，培养90～120h，菌丝浓度不再增加，即可终止发酵。冬虫夏草菌体发酵液，置于浓缩罐内，其真空浓度为79.5kPa(600mmHg)，蒸发量为300kg/h，温度62℃，真空减压浓缩至原液体积的1/5，浓缩完毕，将提取物制成膏或胶囊入药。