[发明专利]微波萃取-固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测畜禽粪便中三类6种雌激素的方法

摘要

本发明提供了一种微波萃取‑固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测畜禽粪便中三类6种雌激素的方法。该方法包括：(1)粪便样品预处理，在提取溶剂加入前加入内标物指示回收率；(2)使用微波萃取仪提取粪便样品中的目标雌激素；(3)使用固相萃取柱富集净化目标雌激素；(4)采用内标法使用液质联用仪检测粪便中三类6种雌激素的含量。该方法采用单因素实验，对提取方法、提取溶剂进行了优化，可一次性同时检测出鸡粪、牛粪、猪粪中三类6种雌激素的残留情况，具有高精密度、高灵敏度、高稳定性、高选择性和检出限低等优点。此方法将指示回收率的内标物加在微波萃取前，能够很好地表示前处理过程中目标物质的损失，使最终结果真实可靠。

主权项

1.一种微波萃取-固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测畜禽粪便中三类6种雌激素的方法，其特征在于，按以下步骤进行：(1)雌激素类物质的提取：微波萃取、液-液萃取称取经冷冻干燥、粉碎、过筛后的畜禽粪便，加入指示回收率的内标物，再加入提取溶剂，经微波萃取、过滤后收集提取液；将提取液浓缩，再吹至近干，用乙腈重新溶解，加入正己烷进行液-液萃取后，所得乙腈层溶液用超纯水稀释，调节pH值；(2)富集净化：固相萃取依次用甲醇和等体积的超纯水活化固相萃取柱，将经步骤(1)处理过的样品过柱即富集，控制水样流速；富集完后依次用超纯水和低浓度的甲醇淋洗，并在真空下干燥固相萃取柱；最后用甲醇洗脱，经氮吹仪吹干，获得残渣；将残渣用一定浓度的甲醇重新溶解，定容，经超声、过滤后转移至进样瓶中，待测；(3)高效液相色谱串联质谱法测定畜禽粪便中三类6种雌激素类物质的含量采用内标法，在高效液相色谱串联质谱仪上，定量检测进样瓶内的畜禽粪便样品中三类6种雌激素的含量；所述的三类6种雌激素是指天然雌激素、人工合成雌激素和有雌激素效应的内分泌干扰物这三类的6种雌激素类物质；6种雌激素分别为雌酮E1、雌二醇E2、雌三醇E3、乙炔基雌二醇EE2、己烯雌酚DES、双酚A即BPA。