[发明专利]一种利用甘蓝DH株根系再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种利用甘蓝DH株根系再生植株的方法，以3个基因型高度纯合的甘蓝DH株根段为外植体，研究甘蓝根系再生植株技术，为每个小孢子再生DH株当年快速扩繁群体创造条件。将不定芽根段接种到不同浓度6‑BA与NAA激素组合的MS分化培养基诱导芽苗的分化。根段在MS+0.03mg/LNAA+4.5mg/L 6‑BA+6mg/L AgNO3+0.1mg/LZnSO4的分化培养基中植株再生率高达90.0％；DH株根段再生植株所用的外植体最佳根龄是20天；不同DH材料的再生能力有显著差异。本发明为每个小孢子再生DH株当年快速扩繁群体创造条件，为提高DH系利用加快育种进程奠定基础。

主权项

一种利用甘蓝DH株根系再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、根系外植体培养栽培甘蓝三个优良杂种一代组合植株抽薹开花，选取单核靠边期的花蕾游离小孢子培养诱导再生植株，当胚状体诱导数个不定芽生长高度达3cm时，至基部切下转接生根培养基上培养再生DH植株，等不定芽诱导出的根生长不同天数后，将试管苗放置8～10℃光照培养箱炼苗5天，随后在超净工作台取出DH植株，无菌水冲洗净根部培养基，然后将一定粗度的根切下放到MS+8～12％蔗糖液体培养基浸泡5～8分钟，冲洗干净，切成1cm的根系段作为外植体；步骤2、根系再生植株培养方式与MS培养基适宜NAA浓度筛选选用DH植株即DH15‑1A的根系为试材，将根系切成1cm长度的根段为外植体；采用二因子系统分组设计，共有两组变量，其一，将供试外植体分设为两组处理；一组处理即进行预培养，3天后转入共培养基中进行培养；另一组处理即直接进行共培养基中培养；其二，将共培养基中的NAA浓度设五个处理，即NAA浓度分别为0.045mg/L、0.03mg/L、0.025mg/L、0.018mg/L、0.015mg/L；预培养基为MS+1.0mg/L2，4‑D+4.5mg/L 6‑BA，共培养基为MS+NAA+4.5mg/L6‑BA+6mg/L AgNO3+0.1mg/LZnSO4；外植体接入三角瓶诱导培养，每个处理选用10个外植体，三次重复；培养温度25℃、光照强度为3000Lx、光照时数12h/d；比较分析DH植株根系再生植株的适宜培养方式和最适NAA浓度；步骤3、根系再生植株适宜根龄筛选选用DH植株即DH15‑1A的根系为试材，待试管中DH15‑1A植株长出能见根系时，开始计算根龄；根龄设15天、20天、25天共三个时间段处理，以上述试验所选根系诱导分化的适宜培养方式和共培养基为培养条件，每个处理选用10个外植体，三次重复；比较分析甘蓝DH15‑1A植株不同根龄再生植株诱导效果；步骤4、不同基因型DH植株根系诱导和植株再生选用DH15‑1A、DH15‑2B、DH15‑3C三种基因型的DH植株20天根系为试材，将根系切成1cm长度的根段为外植体；以上述试验所选根系诱导分化的适宜培养方式和共培养基为培养条件，每个处理选用10个外植体，三次重复；比较分析不同基因型植株诱导效果；同时待不定芽长至2～3cm时，将芽从基部切下，转至生根培养基MS+0.1mg/L NAA上进行培养诱导成再生植株；步骤5、数据计算和处理愈伤诱导率＝诱导出愈伤的外植体数/总外植体数×100％外植体诱导率＝诱导不定芽外植体数/总外植体数×100％不定芽诱导率＝诱导不定芽总数/总外植体数×100％植株再生率＝再生植株数/接种总芽数×100％所得数据采用IBM SPSS statistics 20软件进行差异显著性分析，在0.05和0.01水平上进行多重比较分析。