[发明专利]一种白蚁酒精样品肠道微生物基因组总DNA的提取方法

摘要

本发明公开了一种白蚁酒精样品肠道微生物基因组总DNA的提取方法。本发明采用Tris‑EDTA溶液重新软化酒精浸泡的白蚁组织，利用组织匀浆器低速震荡破碎肠道组织表皮释放肠道微生物，使用溶菌酶处理细菌细胞壁，再结合蛋白酶K及SDS充分裂解微生物细胞，充分释放DNA，最后与DNA提取通用试剂盒联用，从而使本发明提取方法解决了现有方法对白蚁酒精样品难以取得完整肠道组织，肠道微生物群落多样性造成的微生物细胞裂解不完全以及DNA释放效率低，本发明的提取方法通过最大程度保留白蚁酒精样品肠道微生物的丰度及多样性，从提高了群落总DNA提取的质量及完整性。

主权项

一种白蚁酒精样品肠道微生物总DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：取出酒精中浸泡的白蚁，用滤纸吸干表面酒精，风干后放入Tris‑EDTA缓冲液中，冰浴直至白蚁表皮和肠道之间空隙充满缓冲液并呈现半透明状，由此得到浸泡软化后的白蚁；将浸泡软化后的白蚁在解剖镜下首先在第二对足的位置切除头胸部，再从腹部开端撕开表皮，最后剥离完整的中肠与后肠固化组织块，将此组织块转入Tris‑EDTA缓冲液中，用钢珠震荡匀浆器破裂肠道表皮释放微生物，得到肠道微生物群落提取液；在肠道微生物群落提取液中加入溶菌酶进行反应，反应后再加入SDS和蛋白酶K，进行反应裂解，由此得到裂解液，以裂解液作为材料进行DNA提取，由此得到白蚁肠道微生物总DNA。