[发明专利]一种蓝莓的高效快速稳定基因转化方法

摘要

本发明属于基因转化方法技术领域，具体涉及一种蓝莓的高效快速稳定基因转化方法。包括以下步骤：外植体的准备；农杆菌的准备；外植体的一级共培养转化；诱导培养；愈伤组织的二级共培养转化；转基因植株的培养筛选等步骤。本发明综合考虑到蓝莓组织中纤维素等细胞成分基因转化过程的影响，对现有的农杆菌介导的基因转化方法进行改进，分别在幼嫩组织期和愈伤组织期进行农杆菌的共培养转化，基因转化成功率可达25.7％以上，且基因转化蓝莓幼苗分化成活率达99％以上，开发出了一种高效、快速、稳定的基因转化方法。

主权项

一种蓝莓的高效快速稳定基因转化方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，外植体的准备：切取蓝莓组织，浸泡于消毒液中除菌，无菌水清洗，沥干水分，得到外植体，备用；S2，农杆菌的准备：将含有目的基因的农杆菌扩繁培养至菌体浓度OD600＝0.4‑0.8，培养温度为28±1℃，得到农杆菌菌液，备用；S3，一级共培养转化：将无菌纱布浸泡于农杆菌菌液中10min，取出，沥掉多余菌液，将外植体包裹于纱布内，28±1℃孵育12h；加入筛选培养基，150‑220rpm、28±1℃暗室培养24‑48h，得到一级转化处理组织；每升所述筛选培养基的配方如下：牛肉膏10g、酵母膏10g、氯化钠5g、羧甲基纤维素1g、果胶1g、抗性因子20‑50mg，蒸馏水定容至1L，pH 7.0；S4，诱导培养：将纱布内的一级转化处理组织取出，无菌水清洗，置于诱导培养基中培养，28±1℃暗室培养1‑3周，得到愈伤组织；S5，二级共培养转化：将愈伤组织浸泡于农杆菌菌液中，共培养24‑48h，得到二级转化处理组织；S6，转基因植株的培养筛选：将所述二级转化处理组织置于分化筛选培养基中，培养至长出幼苗，得到含有目的基因的转化蓝莓植株；所述分化筛选培养基由以下比例的组分混合而成：MS基本培养基:黄原胶:抗性因子＝1L:5‑10g:20‑50mg。