[发明专利]一种鉴别两种多鳞鱚的微型DNA条形码技术

摘要

本发明公开了一种鉴别两种多鳞鱚的微型DNA条形码技术，该技术包括以下步骤：提取Sillago panhwari与印度鱚DNA；利用DNA条形码引物对两种鱼的DNA模板进行PCR扩增得DNA条形码序列；将扩增产物进行纯化、测序，比对测序结果。有益效果为：本发明通过比对扩增得到的DNA条形码序列来鉴别Sillago panhwari和印度鱚，序列存在12个碱基的差异，表现为8个颠换，1个转换，3个插入/缺失，特征明显，能够准确高效地鉴别巴林多鳞鱚隐存种和多鳞鱚；该鉴别方法简单，结果稳定，可重复性强，扩增结果一致。 1

主权项

1.一种鉴别两种多鳞鱚的微型DNA条形码技术，其特征在于：所述技术包括以下步骤：提取Sillago panhwari与印度鱚的DNA；利用DNA条形码引物对两种鱼的DNA模板进行PCR扩增；对扩增结果进行纯化、测序，比对测序结果。

2.根据权利要求1所述的一种鉴别两种多鳞鱚的微型DNA条形码技术，其特征在于：所述DNA条形码引物序列为：

MIFISH‑U‑F：5’‑GTCGGTAAAACTCGTGCCAGC‑3’；

MIFISH‑U‑R：5’‑CATAGTGGGGTATCTAATCCCAGTTTG‑3’。

3. 根据权利要求1所述的一种鉴别两种多鳞鱚的微型DNA条形码技术，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系组成为：超纯水17.5ul、10×buffer 2.5ul、dNTPs 2ul、rTaq 0.15ul、DNA模板1ul、Primer各1ul。

4.根据权利要求1所述的一种鉴别两种多鳞鱚的微型DNA条形码技术，其特征在于：所述PCR扩增程序为：94℃预变性2min，然后94℃变性20s，50℃退火20s，72℃延伸20s，共进行35个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存∞。

5. 根据权利要求1所述的一种鉴别两种多鳞鱚的微型DNA条形码技术，其特征在于：所述Sillago panhwari的DNA条形码序列为：

CACCGCGGTTATACGAGAGGCCCAAGTTGATAGACATCGGCGTAAAGCGTGGTTAAGAGTACACTTACTAAAGCCGAATACCCCCCCCAGCTGTTATACGCCAGCGGGGTCTTAGAAGCACAATAACGAAAGTAGCTTTATGATACCTGAACCCACGAAAGCTAAGGCA；

所述印度鱚的DNA条形码序列为：

CACCGCGGTTATACGAGAGGCCCAAGTTGATAGACATCGGCGTAAAGCGTGGTTAAGGACTCAACAACTAAAGCCGAATACCCCCCCAGCTGTTATACGCCCGCGGGGAATTAGAAGCACAATCACGAAAGTAGCTTTATTATACCTGAACCCACGAAAGCTAAGGCA。