[发明专利]一种圆叶桉的组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种圆叶桉的组培快繁方法，本发明选择生长良好、无病虫害的圆叶桉，选取带腋芽的茎段或顶芽为外植体，在无菌条件下依次使用75%乙醇和0.1%升汞溶液进行消毒，建立无菌体系，通过改量培养基成分和调控植物外源激素，不经过愈伤组织，直接由外植体萌发腋芽或者不定芽，经过对无菌苗的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽，获得再生植株。本发明具有操作难度低、培养周期短、有效芽多、生根率高、移植成活率高的特点，再生植株保持了母本的优良性状，较传统培育方法大幅缩短育苗时间、节省育苗成本。

主权项

一种圆叶桉的组培快繁方法，其特征在于：采用带腋芽的茎段或顶芽为外植体，利用离体茎段或顶芽直接诱导无菌芽，经过无菌芽的继代增殖培养、壮苗培养、生根培养和炼苗移栽，获得再生植株，该方法的具体步骤如下：（1）选取优良母本：优良母本是指经测算比较，生长速度快、抗虫指标好、叶片形状圆整和叶片颜色好看的植株；（2）外植体的选择：外植体应选取新鲜的带腋芽茎段，去掉所有叶片，保留所有腋芽；（3）外植体的预处理：外植体的预处理是指：用自来水冲洗3‑5min，再用软毛刷沾取洗洁精轻轻刷洗2‑3遍，用纯净水冲洗10‑15min；在超净工作台上，将茎条分成每段5cm左右，带1‑3个茎结的茎段，便于灭菌操作；（4）无菌体系的建立：无菌体系的建立通过75%乙醇和0.1%升汞的处理实现，将带消毒材料用无菌水清洗2‑4遍，再用75%乙醇处理15‑25S，无菌水清洗3‑5遍，每次浸泡清洗2‑3min，洗去残留的乙醇，再用0.1%升汞溶液浸泡并适当搅拌7‑10min，无菌水清洗4‑6遍，每次浸泡清洗2‑3min，洗去残留的升汞溶液，用灭过菌的冷却好的镊子夹取清洗好的茎段，放在无菌的接种盘上，切去茎段两端各0.5‑1cm，减少升汞毒害，再切割成含有一个茎结的茎段，接种于无菌芽诱导的培养基；（5）启动培养：外植体的腋芽或顶芽直接萌发，温度23‑27℃，光照12h/d，光照强度2000‑2500Lux；（6）继代增殖培养：侧芽和不定芽不断生长，当达到1‑1.5cm时，切割转接至继代增殖培养基，在温度23‑27℃，光照12h/d，光照强度2000‑2500Lux条件下培养，随着丛生芽的增加，反复继代，无菌芽苗数量不断增加；（7）壮苗培养：增殖苗大多数都较为瘦弱，将增殖苗接种到壮苗培养基中，在温度23‑27℃，光照12h/d，光照强度2000‑2500Lux条件下培养；（8）生根培养：当芽苗长到2.5‑3cm，并且有3‑4对叶片时，去除芽苗本身的根，转入生根培养基，在温度23‑27℃，光照12h/d，光照强度1500‑2000Lux条件下培养，当冒出根点或者短根时，调整温度23‑27℃，光照12h/d，光照强度2500‑3000Lux条件下培养；（9）炼苗移栽：待观察到苗根系明显时转至大棚，进行炼苗移栽，将培养瓶移至大棚中闭瓶炼苗6天，之后打开瓶盖，加些许水，盖没培养基，防止培养基发霉，开瓶炼苗3天，将生根齐全、根系发达、高3cm以上的瓶苗，洗去培养基，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将根系发育较弱的瓶苗，洗去培养基，用生根粉浸泡10‑20min，移栽到用高锰酸钾消毒过的基质中，将两种苗分开管理。