[发明专利]一种人脐间充质干细胞的冻存方法

摘要

本发明涉及细胞生物技术领域，涉及一种人脐间充质干细胞的冻存方法，尤其是一种改良的快速冻存方法，该方法能在保证细胞形态特性不变的情况下提高细胞的复苏率。本方法将装有人脐间充质干细胞的冻存管置入含有异丙醇的冻存盒内，再放入2cm～4cm厚的泡沫盒内，然后悬吊于液氮蒸汽中，4～6小时候即可直接取出冻存管，浸入液氮中进行低温长期保存。本方法中，异丙醇和泡沫盒的使用能够使细胞在冻存过程中，减少冰晶的形成，减少细胞在冻存过程中受到的伤害。使用该方法冻存细胞，即使冻存5年，细胞复苏率仍高达95%～99%。该方法与常规采用程序降温法冻存细胞相比，有着工艺简单，涉及的仪器设备更少，耗时更短，细胞复苏率高的优点，本发明适合应用于人脐间充质干细胞的长期低温保存。

主权项

一种人脐间充质干细胞的冻存方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）取对数生长期的人脐间充质干细胞，放入离心管内，4℃条件下，以1200rpm的速度离心5分钟，弃掉上清液，沉淀细胞用培养基混匀成单个细胞悬液；（2）配制细胞冻存液：将DMSO、Dextran40按一定比例配制成冻存保护剂，将冻存保护剂放入4℃冰箱预冷30min；（3）按一定比例，将冻存保护剂缓慢加入细胞悬液中，边加边缓慢震动悬液，按1.2 mL/管分装于冻存管中；（4）将冻存管置于冻存盒中，冻存盒底部加入异丙醇，使冻存管底部浸没于异丙醇中；将冻存盒置于泡沫盒中，悬吊于液氮的蒸汽层中，一段时间后，去掉泡沫盒与冻存盒，将冻存管移入液氮中进行深低温长期保存。