[发明专利]同时测定食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素的方法

摘要

本发明公开了一种同时测定食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素的方法，将香兰素和乙基香兰素衍生为丙酸酯后进行测定。检测步骤如下：溶液的配制、标准储备溶液的配制、样品溶液的制备、气相色谱‑质谱定性分析、定量测定。本发明可同时检测粮谷、液体乳、稀奶油、植物油、婴幼儿配方食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素，采用丙酸酐衍生，检测效率高，检测成本低，快速，简便，高效，易推广。

主权项

1.一种同时测定食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素的方法，其特征在于：所述的食品为粮谷食品或婴幼儿配方食品或液体乳或稀奶油或植物油液态食品，首先将食品中香兰素和乙基香兰素衍生为丙酸酯后进行测定，步骤如下：（1）溶液的配制①衍生试剂溶液：取丙酸酐和吡啶，按体积比1∶1的比例混匀；②饱和氯化钠水溶液：称取氯化钠，然后加水，利用超声方式使氯化钠充分溶解，氯化钠与水的用量比为：200g∶500mL；（2）标准溶液的配制①配制标准储备溶液：称取香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素三种标准物质分别置于容量瓶中，均用乙腈定容至刻度，分别得到1mg/mL的香兰素标准储备溶液、甲基香兰素标准储备溶液、乙基香兰素标准储备溶液，并且避光于‑18℃保存；②配制混合标准使用溶液：分别吸取上述三种标准储备液于同一容量瓶中，用乙腈释到刻度，配制成浓度为100μg/mL的混合标准使用溶液，避光于‑18℃保存；（3）样品制备将被测的固态食品样品粉碎成粉末，并且使其全部通过425 μm的标准网筛，或者将液态食品样品混匀；（4）样品溶液的制备将粮谷类食品或婴幼儿配方食品加水，再加入乙腈，食品、水、乙腈的用量比为2 g∶5 mL∶10 mL，涡旋振荡30 s，在室温下超声提取20 min；再加入氯化钠，氯化钠与食品的用量比为1∶1，剧烈摇振30 s，超声10 min，涡旋混匀，以5 000 r/min离心2 min，取上层提取液于具塞磨口玻璃离心管中，加入正己烷和衍生试剂溶液，提取液与正己烷、衍生试剂溶液的用量比为2 mL∶1 mL∶20 μL，涡旋混合10 s，在 60 ℃下衍生10 min，冷却至室温后加入无水硫酸镁后涡旋混合20 s，以5 000 r/min离心1 min，提取液与无水硫酸镁的用量比为1 mL∶100 mg，取下层乙腈用微孔滤膜过滤后待测；所述的微孔滤膜为0.22 μm有机相滤膜；所述的粮谷类食品包括大米和小麦粉，婴幼儿配方食品包括乳粉和米粉；或者将液体乳加入乙腈，液体乳与乙腈的用量比为5 g∶10 mL，涡旋振荡30 s，在室温下超声提取20 min，再加入氯化钠，液体乳与氯化钠的用量比为5 g∶2 g，剧烈摇振30 s，超声10 min，涡旋混匀，以5 000 r/min离心2 min，取上层提取液于具塞磨口玻璃离心管中，加入正己烷和衍生试剂溶液，提取液与正己烷和衍生试剂溶液的用量比为 2 mL∶1 mL∶20μL，涡旋混合10 s，在 60 ℃下衍生10 min，冷却至室温后加入无水硫酸镁，提取液与无水硫酸镁的用量比为1mL∶100 mg 并涡旋混合20 s，以5 000 r/min离心1 min，取下层乙腈用微孔滤膜过滤后待测，所述的微孔滤膜为0.22 μm有机相滤膜；所述的液体乳为巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳；或者将稀奶油加入乙腈，稀奶油与乙腈的用量比为2 g∶10 mL，涡旋振荡30 s，在室温下超声提取20 min，再加入氯化钠，稀奶油与氯化钠的用量比为5 g∶2 g，剧烈摇振30 s，超声10 min，涡旋混匀，以5 000 r/min离心2 min，取上层提取液于具塞磨口玻璃离心管中，加入正己烷和衍生试剂溶液，提取液与正己烷和衍生试剂溶液的用量比为 2 mL∶1 mL∶20μL，涡旋混合10 s，在 60 ℃下衍生10 min，冷却至室温后加入无水硫酸镁，提取液与无水硫酸镁的用量比为1mL∶100 mg 并涡旋混合20 s，以5 000 r/min离心1 min，取下层乙腈用微孔滤膜过滤后待测，所述的微孔滤膜为0.22 μm有机相滤膜；或者将植物油置于玻璃离心管中，加入饱和氯化钠溶液和乙腈，植物油、饱和氯化钠溶液、乙腈的用量比为1 g∶1 mL∶5 mL，涡旋混合30 s，在‑18 ℃下冷冻20 min，以5 000 r/min离心1min，取上层提取液于具塞磨口玻璃离心管中，加入正己烷和衍生试剂溶液，提取液、正己烷、衍生试剂溶液的用量比为2 mL∶1 mL∶20μL，涡旋混合10 s，在 60 ℃下衍生10 min，冷却至室温后加入无水硫酸镁，提取液与 无水硫酸镁的用量比为2 mL∶200 mg，并涡旋混合20 s，以5 000 r/min离心1 min，取下层乙腈用微孔滤膜过滤后待测，所述的微孔滤膜为0.22 μm有机相滤膜；（5）气相色谱‑质谱仪器条件色谱柱：DB‑35MS石英毛细管柱，30 m0.32 mm（i.d），膜厚0.25 μm；色谱柱温度：100 ℃起始，以12 ℃/min升至 220 ℃，再以30 ℃/min升至 280 ℃，保持5 min；进样口温度：230 ℃；色谱‑质谱接口温度：280 ℃；载气：氦气，纯度大于等于99.999 %，1.5 mL/min；进样量：1 μL；进样方式：不分流进样，0.75 min后开阀；所述的质谱条件如下：电离方式：EI；检测方式：选择离子监测方式（SIM）；溶剂延迟：3.0 min；电离能量:70 eV监测离子（m/z）：定量、定性离子和监测时间分组如表1：表1香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的定量、定性离子和监测时间表（6）标准工作曲线制作采用与上述相同处理方法对空白基质进行处理，不加衍生试剂，用处理后的空白基质溶液将混合标准溶液稀释为0.04μg/mL、0.10μg/mL、0.20μg/mL、1.0 μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL标准系列工作溶液，并且分别取标准系列工作溶液加入衍生试剂溶液，标准系列工作溶液与衍生试剂溶液的用量比为1 mL∶20 μL，并且涡旋混合10 s，在 60 ℃下衍生10 min，冷却至室温后进行测定，得到相应的标准溶液的色谱峰面积，以每种化合物的浓度为横坐标，以定量离子的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线；（7）样品测定①定性分析：将样品溶液按照和标准工作溶液相同的仪器条件进行测定；若试样中检出的色谱峰的保留时间与相应标准物质色谱峰的保留时间一致，允许偏差小于±0.05 min；扣除本底后试样中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差在表2规定的范围之内，可判定样品中存在对应的待测物；表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度＞50%＞20%至50%＞10%至20%≦10%允许的最大偏差±20%±25%±30%±50%②定量分析：记录样品溶液中各目标化合物的定量离子的峰面积，根据标准曲线得到待测液中各组分的浓度；试样中各待测组分的响应值应在标准曲线的线性响应范围内，如果含量超出范围，重新取样分析，将衍生前的样品提取液用乙腈稀释后再进行衍生和测定；（8）结果计算：计算公式：……………………………………(1)式（1）中：X —样品中待测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c—从标准曲线中读出的测定液中各待测组分的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；m —试样称取的质量，单位为克（g）；V —试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）。