[发明专利]适合无血清全悬浮培养的BHK细胞及其驯化方法

摘要

本发明提供了一种适合无血清全悬浮培养的BHK细胞及其驯化方法。具体地，本发明提供了一种高效而快速对BHK细胞进行驯化，从而获得适用于无血清全悬浮培养的BHK细胞的方法，以及经驯化BHK细胞及其应用。该驯化方法在无逐步降血清的情况下快速而高效地制得非常适合无血清悬浮培养的BHK细胞，驯化时间短、操作简单、成本低，细胞在转变为悬浮生长过程中形态和特性不易发生转变，成功率高，是一种稳定通用的BHK细胞无血清悬浮驯化的方法。本发明方法制备的BHK细胞生长状态稳定，对口蹄疫病毒的敏感性高，细胞分散，生长快，活细胞密度可达1.1×10⁷细胞/ml或更高，可以在非常高的密度下进行全悬浮培养，非常适合大规模生产。

主权项

1.一种对BHK细胞进行驯化的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：(a)提供一待驯化的BHK细胞，所述的BHK细胞为贴壁培养型BHK细胞；(b)将所述待驯化的BHK细胞作为种子细胞，在无血清培养基中进行驯化培养，从而获得经驯化培养的BHK细胞；和(c)将上一步骤获得的经驯化培养的BHK作为种子细胞，在无血清培养基中进行驯化培养，从而获得进一步驯化培养的BHK细胞，其中该步骤(c)重复n次，n为5‑50的正整数，直至所获得的经驯化培养的BHK细胞为悬浮培养型BHK细胞；其中，在步骤(b)和(c)中，所述无血清培养基含有以下成分：(1)谷氨酰胺，浓度为2000‑4000uM；(2)维生素VB12，浓度为1‑2uM；(3)乙醇胺，浓度30‑50uM；和(4)硒元素，浓度为0.05‑0.2uM。