[发明专利]一种从肝癌组织中分离纯化出CD8+T细胞的方法

摘要

本发明涉及一种的肝癌组织组织分离纯化CD8+T细胞的方法。所述的CD8+T细胞分选的具体步骤包括(1)肿瘤浸润免疫细胞的分离；(2)30％percoll和60％percoll进行不连续的密度梯度离心；(3)MACS磁珠分选CD8+T细胞。本发明结合密度梯度离心和磁珠分选的方法，顺利从肝癌组织中纯化出CD8+T细胞，流式细胞仪对细胞纯度进行鉴定，其纯度达到95％以上，同时其细胞数量也达到3×105以上。

主权项

一种从肝癌组织中分离纯化出CD8+T细胞的方法，所述方法包括：(1)肿瘤浸润淋巴细胞的分离：取离体的肝癌及癌旁组织，PBS洗净，剪碎，加入消化液中，37℃水浴消化30～40分钟，细胞筛过滤细胞，PBS清洗，所得细胞重悬于PBS中，得细胞悬液；所述消化液按如下组成配制：10ml 1640培养液中加入终浓度为0.1％的I型胶原酶，终浓度为0.01％的透明质酸酶和终浓度为0.002％的DNA酶。(2)密度梯度离心：在离心管中依次缓慢加入60％percoll溶液，30％percoll以及细胞悬液，调整离心机升速度为1，降速度为0，离心20min，小心吸取30％percoll和60％percoll交界层处的细胞，PBS洗涤细胞2遍，收集细胞；(3)CD8+T细胞MACS分选：①以MACS Buffer 80ul/每107个细胞重悬，加入CD8+T磁珠20ul/每107个细胞，4℃孵育15min；②加入MACS Buffer，洗涤离心，去除残余磁珠；③MACS Buffer重悬细胞，置于4℃条件下，过MS柱子；④待细胞悬液流尽之后，再加入MACS Buffer洗涤；⑤将柱子取下，用1ml MACS Buffer将细胞冲下，重复两次；⑥换一根新柱子，重复步骤③～⑤，得所述CD8+T细胞。