[发明专利]一种胶乳增强免疫比浊法定量检测莱克多巴胺的试剂

摘要

本发明之目的是提供一种胶乳增强免疫比浊法定量检测莱克多巴胺的试剂，包括试剂R1、试剂R2，试剂R1是由甘氨酸3.75—15.01g、莱克多巴胺—载体抗原复合物0.2—1.1g加蒸馏水定容至1000ml制成，试剂R2是由甘氨酸1.4—7.0g、聚乙二醇6000 10‑30 g、羧基胶乳与抗莱克多巴胺单克隆抗体交联胶乳100‑600mg、牛血清白蛋白（BSA）10‑30 g、Proclin300 1‑5 ml，加蒸馏水定容至1000ml制成，本发明组方科学合理，易生产制备，使用方便、安全、准确，可有效用于快速检测食品中的莱克多巴胺，确保食品安全，经济和社会效益显著。

主权项

一种胶乳增强免疫比浊法定量检测莱克多巴胺的试剂，其特征是：包括试剂R1、试剂R2，试剂R1是由甘氨酸3.75—15.01g、莱克多巴胺—载体抗原复合物0.2—1.1g加蒸馏水定容至1000ml制成，载体蛋白为牛血清白蛋白（BSA），其中，莱克多巴胺—载体抗原复合物制备方法是：莱克多巴胺150mg，加入4ml含22.8mg戊二酸酐的吡啶溶液中，室温搅拌下反应22h，搅拌速度150rpm/分钟，反应后真空抽干反应物中的吡啶，得沉淀物，沉淀物溶解于8ml由DMF与1,4‑二恶烷按1:1配制的溶剂中，加入正三丁胺52.4μl和氯甲酸异丁酯28.8μl，冰浴反应1h，再将该反应液逐滴加入10ml4℃预冷的质量浓度为0.2%的BSA溶液中，4℃反应48小时，反应物在0.01M PH=7.2 PBS中透析48小时，透析时每4小时换水一次，除去未反应的试剂，透析后反应物即为莱克多巴胺—载体抗原复合物；所述的试剂R2是由甘氨酸3.75—15.01g、聚乙二醇6000 10‑30 g、羧基胶乳与抗莱克多巴胺单克隆抗体交联胶乳100‑600mg、牛血清白蛋白（BSA）10‑30 g、Proclin300 1‑5 ml，加蒸馏水定容至1000ml制成，其中，羧基胶乳与抗莱克多巴胺单克隆抗体交联胶乳的制备方法是：(l)活化羧基：称取羧基胶乳颗粒20‑200mg，胶乳颗粒大小50‑500nm，溶于PH6.5，50mM 10ml MES中，称取交联剂EDC 20mg、S‑NHS 20mg依次加入上述胶乳溶液中震荡反应1h活化胶乳颗粒，随后离心，20000rpm，40分钟，离心后去上清，沉淀使用MES PH6.5,50mM 10ml复溶，重复离心二次；沉淀溶于10ml 0.01M PH7.2 PBS液中，即为活化胶乳；(2)活化后胶乳每毫升中加入400ug抗莱克多巴胺单克隆抗体，室温搅拌下反应4小时；随后每毫升加入10%BSA溶液500ul，继续室温搅拌反应2小时 ；离心20000rpm，40分钟，去上清，沉淀使用甘氨酸溶液复溶即制成羧基胶乳与抗莱克多巴胺单克隆抗体交联胶乳。