[发明专利]一种正相高效液相色谱法测定索氟布韦原料药非对映异构体及杂质含量的方法

摘要

本发明涉及一种正相高效液相色谱法测定索氟布韦原料药非对映异构体及杂质含量的方法，包括样品配制、样品测定和含量计算，其中，样品测定选用岛津LC‑20AT高效液相色谱仪且配二极管阵列检测器，CHIRALCEL AD‑H  250mm×4.6mm，5μm正相色谱柱，20℃柱温，20µl进样量，260nm检测波长，1.0ml/min流速，流动相A相为正己烷，B相为乙醇，梯度洗脱程序0～35min，B相从15%升至25%，A相从85%降至75%；35～36min，B相从25%降至15%，A相从75%升至85%；柱后平衡9min。本发明的优点在于本发明检测方法中溶剂不干扰非对映异构体检测，样品中无干扰非对映异构体测定的峰，方法专属性良好，且该检测方法简便、快速、准确、灵敏度高、准确度好、重复性好。

主权项

一种正相高效液相色谱法测定索氟布韦原料药非对映异构体及杂质含量的方法，其特征在于：包括样品配制、样品测定和含量计算，具体包括以下步骤：（1）空白溶剂：选用HPLC级乙醇作为空白溶剂；（2）非对映异构体SF‑Z1定位溶液配制：取非对映异构体SF‑Z1约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，混匀，即得；（3）非对映异构体SF‑Z2定位溶液配制：取非对映异构体SF‑Z2约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，混匀，即得；（4）非对映异构体SF‑Z3定位溶液配制：取非对映异构体SF‑Z3约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，混匀，即得；（5）杂质SF‑正丙酯定位溶液配制：取杂质SF‑正丙酯约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，精密量取上述溶液1ml，置10ml量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，混匀，即得；（6）系统适用性溶液配制：取索氟布韦对照品、非对映异构体SF‑Z1、非对映异构体SF‑Z2、非对映异构体SF‑Z3和杂质SF‑正丙酯适量，精密称定，用乙醇溶解并稀释制成含1mg/ml的索氟布韦、含1μg/ml的非对映异构体SF‑Z1、含1μg/ml的非对映异构体SF‑Z2、含1μg/ml的非对映异构体SF‑Z3和含1μg/ml的杂质SF‑正丙酯的溶液，作为系统适用性溶液；（7）对照溶液配制：取索氟布韦对照品、非对映异构体SF‑Z1、非对映异构体SF‑Z2、非对映异构体SF‑Z3和杂质SF‑正丙酯适量，精密称定，用乙醇溶解并稀释制成含1μg/ml索氟布韦、含1μg/ml的非对映异构体SF‑Z1、含1μg/ml的非对映异构体SF‑Z2、含1μg/ml的非对映异构体SF‑Z3和含1μg/ml的杂质SF‑正丙酯的溶液，作为对照溶液；（8）样品溶液配制：取索氟布韦原料药适量，精密称定，加乙醇溶解并稀释成每1ml中含索氟布韦1mg的溶液，作为样品溶液；（9）样品测定：选用岛津LC‑20AT高效液相色谱仪且配二极管阵列检测器，CHIRALCEL AD‑H 250mm×4.6mm，5μm正相色谱柱，20℃柱温，20µl进样量，260nm检测波长，1.0ml/min流速，流动相：A相为正己烷，B相为乙醇，梯度洗脱程序：0～35min，B相从15%升至25%，A相从85%降至75%；35～36min，B相从25%降至15%，A相从75%升至85%；柱后平衡9min，分别吸取空白溶剂、非对映异构体SF‑Z1定位溶液、非对映异构体SF‑Z2定位溶液、非对映异构体SF‑Z3定位溶液、杂质SF‑正丙酯定位溶液、系统适用性溶液、对照溶液、样品溶液各20µl，注入高效液相色谱仪，记录各色谱图；（10）含量计算：根据各色谱图，通过外标法计算样品中各非对映异构体及杂质的含量：，A异构体表示供试品溶液色谱图中异构体的峰面积；A对照表示对照溶液色谱图中异构体的峰面积；C供试表示供试品溶液的浓度；C对照表示对照溶液中异构体的浓度；供试品溶液的色谱图如有异构体的峰，按外标法计算不得大于0.1%。